[发明专利]一种小麦白粉菌的LAMP检测引物组合及其LAMP检测试剂盒和LAMP方法

说明书

本发明公开了一种小麦白粉菌的LAMP检测引物组合及其LAMP检测试剂盒和LAMP方法，属于生物技术领域。该LAMP引物组合由正向外引物F3，反向外引物B3，正向内引物FIP，反向内引物BIP组成。本发明的检测方法可同时检测所有小麦白粉菌，并可区分其他近源白粉菌，特异性强、准确性高、操作简便、实用性好、实现了等温扩增，可用于小麦白粉菌的高灵敏度快速检测，易于大规模推广。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种小麦白粉菌(Blumerialgraminisf.sp.tritici)的LAMP检测引物组合及其LAMP检测试剂盒和LAMP方法。

背景技术

小麦白粉菌是属于气流传播的病害，主要通过白粉菌的分生孢子随气流传播。在90年代之前，主要依靠传统形态学分类方法区分鉴定不同种类的白粉菌，90年代以后，随着PCR (Polymerase Chain Reaction，PCR)技术日臻成熟，基于PCR技术的快速分子诊断方法，被广泛应用于包括白粉菌在内的植物病原菌研究领域。较常规显微镜形态观察检测方法，PCR检测更为精准、高效和灵敏。

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)是一种新的等温扩增技术，因其操作简单快速、特异性、灵敏度高、成本低等特点，逐渐成为可以替代传统PCR 的新的核酸扩增检测技术。它是针对靶基因的6个区域设计4条特异引物，利用BstDNA聚合酶的链置换活性在同一反应体系中恒温高效扩增，大量合成目的DNA的同时，产生副产物-白色焦磷酸镁沉淀。由于扩增反应依赖于靶DNA的6个独立的区域，因此特异性非常高，反应在等温条件下进行，则不需要PCR仪等昂贵设备，仅用水浴锅等能够维持稳定恒温的设备即可完成，检测成本大大降低，应用范围显著扩大，可以在田间进行实时监测。

发明内容

针对以上存在的问题，本发明的目的是提供一组LAMP引物组合，能够检测植物病原小麦白粉菌。

本发明的另一目的是提供上述小麦白粉菌的LAMP检测试剂盒。

本发明的另一目的是提供上述小麦白粉菌的LAMP检测方法。

发明人经过大量实验和不懈努力，获得了一种用于小麦白粉菌的LAMP引物组合，由正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP、反向内引物BIP组成，各引物序列如下：

FIP：5’- TAAGCAAGAGGCTGTTTGGTCGACCCAGGATGATGTTCTCGGA-3’；

BIP：5’- TCCCTCAGTAAATGGCATTGGCAGGGTTCTTGAGCCTTAGGTAC-3’；

F3： 5’-TTGTCATCAGGGGCTACATTA-3’；

B3： 5’-GCCAACTACAGCTCACAGAG-3’。

优选地，如上所述的一种用于小麦白粉菌的LAMP引物组合在检测小麦白粉菌中的应用。

优选地，如上所述的小麦白粉菌的LAMP引物组合在检测小麦白粉菌中的应用，可制备为一种检测小麦白粉菌的LAMP试剂盒，包含以下成分：

(1)包含上述引物组合的引物混合液，浓度分别为：正向外引物F3 1μM、反向外引物B3 1 μM、正向内引物FIP 8μM、反向内引物FIP 8μM；

(2)反应液及染料，包含：7mMdNTPs、100mMTris-HCl，50mMKCl，50mM(NH₄)₂SO4，40mMMgSO₄、0.5％Triton X-100、5MBetain、40U Bst DNA聚合酶，FDR；