[发明专利]一种小麦白粉菌的LAMP检测引物组合及其LAMP检测试剂盒和LAMP方法

权利要求书

1.一种小麦白粉菌的LAMP检测引物组合，其特征在于：由正向外引物F3、反向外引物B3、正向内引物FIP和反向内引物BIP组成，各引物序列如下：

FIP：5’- TAAGCAAGAGGCTGTTTGGTCGACCCAGGATGATGTTCTCGGA-3’；

BIP：5’- TCCCTCAGTAAATGGCATTGGCAGGGTTCTTGAGCCTTAGGTAC-3’；

F3： 5’-TTGTCATCAGGGGCTACATTA-3’；

B3： 5’-GCCAACTACAGCTCACAGAG-3’。

2.权利要求1所述引物组合在检测小麦白粉菌中的应用。

3.一种检测小麦白粉菌的LAMP试剂盒，其特征在于，包含以下成分：

(1)含权利要求1所述的LAMP检测引物组合，浓度分别为：正向外引物F3 1μM、反向外引物B3 1μM、正向内引物FIP 8μM和反向内引物FIP 8μM；

(2)反应液及染料，包含：7mMdNTPs、100mMTris-HCl、50mMKCl、50mM(NH4)₂SO₄、40mMMgSO₄、0.5％Triton X-100、5MBetain、40U Bst DNA聚合酶和FDR；

(3)阳性对照为小麦白粉菌的基因组DNA，阴性对照为不含目的基因的反应混合液。

4.权利要求3所述的一种检测小麦白粉菌的LAMP试剂盒在检测小麦白粉菌中的应用。

5.一种小麦白粉菌的LAMP方法，其特征在于：提取待测样品的总DNA，取1μL DNA溶液，加入5μL反应液及染料、5μL如权利要求1所述的LAMP检测引物组合和14μL灭菌超纯水进行LAMP反应，反应程序为65℃，时间为60min，扩增产物进行颜色变化的观察，显示橙色表示检测为阴性，不存在小麦白粉菌，而显示绿色为阳性，样品中存在小麦白粉菌；反应液及染料包含：7mMdNTPs、100mMTris-HCl、50mMKCl、50mM(NH4)₂SO₄、40mM MgSO₄、0.5％Triton X-100、5MBetain、40U Bst DNA聚合酶和FDR。