[发明专利]一种咖啡酸糖苷类化合物、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种咖啡酸糖苷类化合物的制备方法，所述咖啡酸糖苷类化合物具有如下结构：

其分子式为C₁₆H₂₀O₉，命名为：顺式-1-O-甲基-6-O-咖啡基-β-D-葡萄糖；所述的咖啡酸糖苷类化合物的制备方法，其特征在于，所述咖啡酸糖苷类化合物以三叶悬钩子为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、柱层析和高效液相色谱分离步骤制得，具体步骤为：

(1)浸膏提取：将三叶悬钩子的茎和叶粉碎后用第一溶剂提取，然后除去第一溶剂得到粗提取物；

(2)有机溶剂萃取：将步骤(1)得到的粗提物悬浮于水中，用第二溶剂萃取，然后除去第二溶剂，得到黑色浸膏；将黑色浸膏进行树脂柱层析，依次用水、甲醇和丙酮洗脱，收集甲醇洗脱液，除去甲醇得到甲醇浸膏；

(3)柱层析：以氯仿与甲醇体积比1:1的混合溶剂溶解步骤(2)得到的甲醇浸膏，然后吸附在200～300目的硅胶上，干法装柱；以氯仿与甲醇的体积比为1:0,50:1,20:1,10:1,1:1的混合溶剂进行梯度洗脱；收集10:1的洗脱液，除去溶剂得到洗脱样品A；用甲醇溶解洗脱样品A，将其吸附在RP-18上，干法柱层析，依次以5v/v％甲醇、70v/v％甲醇、85v/v％甲醇、100v/v％甲醇洗脱，收集5v/v％甲醇洗脱液，除去溶剂得到洗脱样品B；将洗脱样品B用氯仿与甲醇体积比13:1的混合溶剂经硅胶柱反复柱层析，再用氯仿与甲醇体积比1:2的混合溶剂经Sephadex LH-20柱层析，得到所述的咖啡酸糖苷类化合物及其反式异构体的混合物；

(4)高效液相色谱分离：经高效液相色谱分离纯化步骤(3)得到混合物，即得到所述的咖啡酸糖苷类化合物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的第一溶剂为体积浓度为70～100％的甲醇水溶液或体积浓度为90～100％的乙醇水溶液，所述提取为索氏回流提取。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的第二溶剂为石油醚。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述的高效液相色谱是以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为278nm；流动相为体积浓度为22％的甲醇水溶液，流速为15～25ml/min，每次进样10～100μL，收集20min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得到所述的咖啡酸糖苷类化合物。