[发明专利]一种基因组简化与二代测序SNP复合检测体系和检测方法

权利要求书

1.一种基因组简化与二代测序SNP复合检测体系和检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：选取目标DNA，并利用内切酶对目标DNA进行酶切，以便获得目标DNA片段，完成后，将其置于零下10-零下2摄氏度的无菌储存箱内，备用；

S2：再次选取DNA模板，并在DNA模板表面涂抹DNA模板制备液，且DNA模板制备液需均匀涂抹，以保证反应的准确度；

S3：向S1中处理的目标DNA片段内添加DNA修复酶，并在15-25摄氏度的环境下，能够将目标DNA片段末端进行修复，然后再次向其中添加碱基，并将其储存3-6h，然后备用；

S4：将S3中储存后的目标DNA片段取出，并在放置在15-25摄氏度的反应器皿内，并将目标DNA片段分别与甲基化引物相连接，从而获取的连接产物；

S5：将S4中产生的连接产物置于S2中的DNA模板内，并将目标DNA片段结合到扩增引物表面，然后将目标DNA片段进行扩增，从而能够形成扩增产物；

S6：将形成的扩增产物内添加底物，从而能够合成第一个碱基，并清除所有游离的碱基，在测序时，选取PTP平板，且PTP平板表面含有160万个光纤孔，光纤孔内载有化学发光反应所需的各种酶以及底物，然后将碱基依照T、A、C、G的顺序依次循环进入PTP平板，假如发生碱基配对，会释放焦磷酸，焦磷酸在酶的作用下，形成氧化荧光素，同时释放光信号，以获取信号；

S7：将S6中释放的光信号，实时利用高灵敏度CCD捕获，碱基和PTP平板进行配对，然后捕获到一分子的光信号，由此一一对应，能够准确、快速的确定待测模板的碱基序列。

2.一种根据权利要求1所述的DNA模板的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

A、选取动物细胞，并将动物细胞置于离心管或PCR管中，然后在50-60摄氏度的条件下保温10-13min；

B、然后向其中加入蛋白酶K溶液，并实时进行晃动，且蛋白酶K终浓度为1.0-3.0mg/ml；

C、在70-85摄氏度的条件下保温30-55min后，离心取上清，形成上清液，然后再次向上清液中添加DNA模板制备液，完成后，即得到DNA模板。

3.根据权利要求1所述的一种基因组简化与二代测序SNP复合检测体系和检测方法，其特征在于：在S2中对目标DNA片段进行修复前，需要预先对目标DNA片段进行纯化，以保证目标DNA片段的干净度。

4.根据权利要求1所述的一种高通量简化基因组测序文库的构建方法，其特征在于：在S4中的甲基化引物序列为：

引物序列P1：CTACGACGAGATGACATATT,

引物序列P2：ATCGATACGACGACGATCAG。

5.根据权利要求1所述的一种高通量简化基因组测序文库的构建方法，其特征在于：在S5中的扩增引物序列为：

引物序列P1：CGACTACGAGATGTCATATC,

引物序列P2：ACTGTACTGACGACGTTCGA，

引物序列P3：ACTGATCGGCATACAGTGCA。