[发明专利]鉴别血清I型马立克病毒基因缺失疫苗、传代致弱疫苗与野毒的引物、探针及试剂盒

权利要求书

1.一组引物和探针，所述引物和探针包括：第一对引物和探针，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1-SEQ ID NO.3所示；

和第二对引物和探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4-SEQ ID NO.6所示。

2.权利要求1所述的引物和探针在制备鉴别血清I型马立克病毒基因缺失疫苗、传代致弱疫苗与野毒的诊断试剂或试剂盒中的应用。

3.一种鉴别血清I型马立克病毒基因缺失疫苗、传代致弱疫苗与野毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1所述的引物和探针。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括：阳性标准品和荧光定量PCR反应试剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性标准品为pMP重组质粒，是由MDV meq基因前450bp与MDV野毒pp38基因的串联序列1324bp克隆入pMD19载体构建而成。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光定量PCR反应试剂包括：Gene Expression Master Mix buffer和ddH2O。

7.一种鉴别血清I型马立克病毒基因缺失疫苗、传代致弱疫苗与野毒的诊断试剂，其特征在于，所述诊断试剂含有权利要求1所述的引物和探针。

8.权利要求3-6任一项所述的试剂盒或权利要求7所述的诊断试剂在如下(1)-(5)中任一种中的应用：

(1)鉴别血清I型马立克病毒基因缺失疫苗、血清I型疫苗与野毒株；

(2)检测样品是否感染马立克病毒；

(3)检测样品是否已进行MD疫苗免疫接种；

(4)检测样品进行免疫接种的疫苗类型；

(5)精确检测疫苗毒与野毒拷贝数，明确鸡群疫苗的免疫状态以及野毒感染的进程。

9.一种鉴别血清I型马立克病毒基因缺失疫苗、传代致弱疫苗与野毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

采用权利要求1所述的引物和探针对样品DNA进行荧光定量PCR扩增，根据扩增情况进行判定：

若SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.3所示的第一对引物和探针以及SEQ ID NO.4-SEQ IDNO.6所示的第二对引物和探针均能特异性扩增，则为MDV野毒；

若SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.3所示的第一对引物和探针不能扩增，而SEQ ID NO.4-SEQID NO.6所示的第二对引物和探针能特异性扩增，则为血清I型马立克病毒基因缺失疫苗；

若SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.3所示的第一对引物和探针能特异性扩增，而SEQ IDNO.4-SEQ ID NO.6所示的第二对引物和探针不能扩增，则为传代致弱疫苗。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：荧光定量PCR扩增的条件为：50℃2分钟；95℃10分钟；94℃15秒，60℃1分钟，40个循环。