[发明专利]牛生殖细胞的冷冻保存用组合物和冷冻保存方法

权利要求书

1.一种牛精子的冷冻保存液，为用于使牛精子悬浮并冷冻的牛精子的冷冻保存液，其特征在于，包含：

0.3～0.9w/w％的防冻聚氨基酸，包含由下式(I)所示的结构单元以及由下式(II)所示的结构单元，并且由下式(II)所示的结构单元的比例为50～99mol％；以及

2～4w/w％的甘油，

2.根据权利要求1所述的牛精子的冷冻保存液，其特征在于，

所述冷冻保存液为将防冻聚氨基酸和甘油添加到Dulbecco改良培养基(DMEM)、Eagle的MEM培养基(MEM)、其他的细胞用培养液或者其他的生理溶液中，同时调整pH范围为7.0～8.0，进而添加源自牛精液的液体以使所述源自牛精液的液体为5～20w/w％的水溶液。

3.一种牛精子的冷冻保存方法，其特征在于，包括：

通过添加了包含由下式(I)所示的结构单元和由下式(II)所示的结构单元并且由下式(II)所示的结构单元的比例为50～99mol％的防冻聚氨基酸和甘油的生理溶液，将牛的精液稀释至5～20倍，使牛精子悬浮在包含0.3～0.9w/w％的防冻聚氨基酸、2～4w/w％的甘油以及源自于牛的精液的一部分的冷冻保存液中的稀释工序；

使牛精子悬浮的冷冻保存液冷冻在管状的容器中的工序；以及

之后保持在-60℃以下的温度进行保存的工序，

4.根据权利要求3所述的牛精子的冷冻保存方法，其特征在于，

所述稀释工序包括：

用生理溶液将牛的精液稀释至2.5～10倍，并保持在2～8℃的第一稀释工序；以及

保持在2～8℃的同时，通过点滴将添加了防冻聚氨基酸和甘油的生理溶液添加到通过第一稀释工序而获得的悬浮液中，进一步稀释将牛的精液稀释至5～20倍的第二稀释工序。

5.根据权利要求3或4所述的牛精子的冷冻保存方法，其特征在于，使用直径为5mm以下的冷冻保存用吸管，冷却至-140℃以下。

6.根据权利要求3或4所述的牛精子的冷冻保存方法，其特征在于，在冷冻融解6小时后，运动精子率能够为30％以上，快速前向运动率为10％以上。