[发明专利]耐热性异淀粉酶

说明书

本发明提供最适温度进一步提高、即耐热性提高了的新的异淀粉酶和其制造方法。所述异淀粉酶是在由序列号1所示的氨基酸序列构成的异淀粉酶或者序列号1所示的氨基酸序列中缺失、取代或插入有1个～多个的氨基酸残基的异淀粉酶中，具有选自D268A、M277I、A549P、A554P和A580T中的1个或2个以上的氨基酸变异。

技术领域

本发明涉及耐热性提高了的变异异淀粉酶和该变异异淀粉酶的制造方法。

背景技术

在糖化工业中，作为将淀粉、支链淀粉中的α－1,6－吡喃葡萄糖苷键水解的酶，已知有肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)等生产的普鲁兰酶和异淀粉酶。其中，已知异淀粉酶是将淀粉、支链淀粉、糖原中的α－1,6－吡喃葡萄糖苷键水解的酶，由于未发现可逆反应，因此，通过使用其它淀粉酶、葡糖淀粉酶等，能够生产高纯度的葡萄糖、麦芽糖。作为异淀粉酶生产菌，报告有淀粉假单胞菌(Pseudomonas amyloderamosa)(非专利文献1)等。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：8tarch(1996),48：295－300

发明内容

但是，淀粉假单胞菌等生产的异淀粉酶的最适温度比其它淀粉酶的最适温度低，在工业使用水平的反应温度带时难以并用。

因此，本发明的课题在于提供最适温度进一步提高、即耐热性提高了的新的异淀粉酶和其制造方法。

因此，本发明人制造了将所述淀粉假单胞菌等生产的异淀粉酶的氨基酸序列的一部分进行修饰而得的蛋白质并对其耐热性进行了研究，结果发现通过使特定位置的氨基酸变异成其它氨基酸，得到耐热性提高了5℃～10℃的变异异淀粉酶，从而完成了本发明。

即，本发明提供以下的[1]～[10]。

[1]一种异淀粉酶，在由序列号1所示的氨基酸序列构成的异淀粉酶或者序列号1所示的氨基酸序列中缺失、取代或插入1个～多个氨基酸残基的异淀粉酶中，具有选自D268A、M277I、A549P、A554P和A580T中的1个或2个以上的氨基酸变异。

[2]根据[1]所述的异淀粉酶，其中，氨基酸变异为包含选自D268A、M277I、A549P、A554P和A580T中的2～5重变异的变异。

[3]根据[1]或[2]所述的异淀粉酶，其中，氨基酸变异为包含选自A554P、M277I、D268A、A580T、A554P/M277I、A554P/M277I/D268A、A554P/M277I/D268A/A549P和A554P/M277I/D268A/A549P/A580T中的变异的变异。

[4]根据[1]～[3]中任一项所述的异淀粉酶，其中，氨基酸变异为包含选自A554P/M277I、A554P/M277I/D268A、A554P/M277I/D268A/A549P和A554P/M277I/D268A/A549P/A580T中的变异的变异。

[5]一种基因，编码[1]～[4]中任一项所述的异淀粉酶。

[6]一种重组载体，具有[5]所述的基因。

[7]一种转化体，是用[6]所述的重组载体进行转化而得到的。

[8]一种异淀粉酶的制造方法，其特征在于，培养[7]所述的转化体并从该培养物采集异淀粉酶。

[9]一种淀粉糖化用酶组合物，含有[1]～[4]中任一项所述的异淀粉酶。

[10]根据[9]所述的淀粉糖化用酶组合物，进一步含有选自β－淀粉酶、α－淀粉酶和葡糖淀粉酶中的酶。