[发明专利]高效便捷提取水稻DNA的方法

说明书

本申请公开了一种高效便捷提取水稻DNA的方法，包括如下步骤：(1)将200μL96孔PCR板置于冰上，用打孔器分别取2片新鲜叶片放入PCR板上；(2)每孔加入70μL缓冲液A，用封板膜封好，立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃，保持10min；(3)取出平板，迅速加入等体积的缓冲液B，混匀。步骤(3)中的提取液1μL能够直接作为模板DNA进行PCR检测。本发明方法利用PCR板高效便捷提取水稻DNA，并缩短PCR加样时间。

技术领域

本发明涉及分子生物学遗传育种技术领域，具体地说涉及一种利用PCR板高效便捷提取水稻DNA的方法。

背景技术

DNA的提取是植物分子遗传学及遗传工程的前提。通常DNA提取方法需要满足以下几个主要条件：所得DNA具备理想的纯度；DNA完整，断裂少，降解程度小；方法方便便捷，成本低。提高基因组DNA制备的效率和降低成本是从事DNA分子标记工作者共同关心的问题。

目前，关于水稻基因组DNA提取方法有诸多报道，但常规提取方法如CTAB法和大量面市的DNA提取试剂盒，虽然可提到高质量的DNA，但提取过程烦琐，成本较高，不便于应用在大规模的基因型检测作业中。

而一些简易的适用于分子标记辅助选择、作图群体、突变体筛选、种子检验等需要大批量样品进行基因型分析的DNA提取方法，虽然已有不少简化，但仍存在操作步骤复杂、成本较高或其制备的模板DNA的扩增结果不够稳定或只适用于叶片DNA的提取等问题，因而还需进一步探索高效、快速、简便、低成本的DNA提取方法

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供了一种利用PCR板高效便捷提取水稻DNA，并缩短PCR加样时间的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种高效便捷提取水稻DNA的方法，包括如下步骤：

(1)将200μL96孔PCR板置于冰上，用打孔器分别取2片新鲜叶片放入PCR板上；

(2)每孔加入70μL缓冲液A，用封板膜封好，立刻将平板放入PCR仪中加热到95℃，保持10min；

(3)取出平板，迅速加入等体积的缓冲液B，混匀。

步骤(3)中的提取液1μL能够直接作为模板DNA进行PCR检测。

进一步的，如需存留一周以上的时间进行PCR检测，则用排枪吸取上述提取液40μL到一块新的200μL 96孔PCR孔板内，加入3倍提取液体积的TE缓冲液；放入4℃冰箱保存，备用。

步骤(2)中所述缓冲液A为新鲜溶液。

步骤(2)中所述缓冲液A进一步包括：800μL 20％Tween20。

步骤(2)中所述缓冲液A进一步包括：160μL 5mol/L NaOH。

步骤(2)中所述缓冲液A进一步包括：7.04mL ddH₂O

步骤(3)中所述缓冲液B进一步包括：1mL pH8.01mol/L Tris-HCl。

步骤(3)中所述缓冲液B进一步包括：40μL pH8.00.5mol/LEDTA。

步骤(3)中所述缓冲液B进一步包括：8.96mL ddH₂O。

本发明有益的技术效果包括：

(1)本发明仅用NaOH、Tween20、Tris-HCl和EDTA 4种化学试剂，共140μL提取液，成本低。

(2)本发明操作简便，仅需3步，每人每天可以提取上千份样品。

(3)本发明仪器设备简单，只需常规的PCR仪。