[发明专利]一种鸡巻羽性状的分子鉴定方法

说明书

本发明公开了一种鸡巻羽性状的分子鉴定方法，包括如下步骤：S1.提取待测样本血液DNA；S2.以S1所述DNA为模板，利用SEQ ID NO：1～2所述引物进行PCR扩增反应；S3.将S2的PCR扩增产物用限制性内切酶Pdil（NaeI）进行酶切反应，酶切产物电泳检测；S4.根据S3的酶切产物电泳情况进行结果判定。本发明有效地利用了巻羽性状的分子特征，大大节省了成本，同时达到了快速准确鉴定的预期效果，对巻羽性状的鉴定节约了大量的时间及资源，克服了传统PCR扩增无法区分基因型的缺陷和不足。

技术领域

本发明属于动物遗传育种技术领域，更具体地，涉及一种鸡卷羽性状的分子鉴定方法。

背景技术

卷羽鸡，又称麒麟鸡、翻毛鸡，是产于粤西一带的特色鸡种，据宋代学者周去非所著《岭外代答》一书记载，至今已有840多年历史。该鸡种部分皮肤裸露，散热性能良好，是一个适合热带高温环境饲养的特色肉鸡品种。羽毛作为禽类一个重要的外貌特征，其独特的卷羽性状与片羽(正常羽)具有显著差异；卷羽作为家禽羽型中重要的一种类型，有利于鸡体表的散热，适合热带或我国南方地区饲养，对于抗热应激鸡种的培育有着重要的作用，可利用卷羽性状通过基因工程技术培育卷羽鸡新品种以及对纯种巻羽鸡的选育，因此有必要对卷羽性状进行准确而有效的分子鉴定。目前已存在的参照基因组序列把鸡作为一种重要的模式生物去理解基因组进化、群体遗传、表型特征的遗传基础，由于鸟纲之间联系紧密，对鸡表型变化的分子和遗传基础的阐明对应用于其他野生鸟类有着重要意义，因而，对鸡的遗传和基因组研究可以为鸟类的发展和进化提供信息。本发明为揭示禽类卷羽性状的分子鉴定机制提供了参考，为禽类卷羽新品种的培育提供了基础。

本发明人课题组通过克隆卷羽麒麟鸡KRT75L4基因序列与PCR扩增直接测序法测序在KRT75L4存在15bp缺失，说明麒麟鸡的卷羽性状与KRT75L4基因的变异有关；由于卷羽鸡与片羽鸡相比，仅在KRT75L4基因处缺失有15bp的片段，因此针对KRT75L4基因两端设计引物的普通的PCR难以区分如此细微的条带，且无法适用于杂合的半卷羽性状的鉴定。由于鸡的品种众多，开发一种普遍适用的检测引物无疑具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有鸡卷羽性状鉴定中存在的缺陷和不足，提供一种可快速鉴定鸡卷羽性状的方法和试剂盒。

本发明的第一个目的是提供一种用于鉴定鸡巻羽性状的PCR引物。

本发明的第二目的是提供一种鸡巻羽性状的分子鉴定方法。

本发明的第三个目的是提供一种鸡卷羽性状检测试剂盒。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

一种用于鉴定鸡巻羽性状的PCR引物，所述引物包含上游引物F和下游引物R，其序列依次如SEQ ID NO：1～2所示。

本发明通过比较不同品种鸡KRT75L4基因的同源性，设计了覆盖卷羽鸡15bp缺失片段的PCR扩增引物，经过大量预实验，设计筛选出了一对普遍适用于不同品种鸡KRT75L4基因的扩增引物，其序列如SEQ ID NO：1～2所示，所述扩增引物的扩增产物大小为540bp；由于鸡KRT75L4基因的序列长达17.29kb(如SEQ ID NO：4所示)，而缺失突变的15bp位于其2089～2103bp处，考虑到KRT75L4基因在不同品种鸡中的碱基差异性，如何在17.29kb中选择出一对特异性强，扩增效率高，扩增产物大小合适，普遍适用在众多鸡品种的扩增引物是决定本发明检测方法适用性广的决定因素，同时还要考虑在扩增产物中除缺失片段15bp处存在本发明需要的酶切位点外，其它地方不存在相同的酶位点。

本发明还请求保护所述PCR引物在鉴定鸡巻羽性状和/或制备卷羽性状检测试剂盒中的应用。

一种鸡巻羽性状的分子鉴定方法，包括如下步骤：

S1.提取待测样本血液DNA；