[发明专利]一种鸡巻羽性状的分子鉴定方法

权利要求书

1.一种用于鉴定鸡巻羽性状的PCR引物，其特征在于，所述引物包含上游引物F和下游引物R，其序列依次如SEQ ID NO：1～2所示。

2.权利要求1所述PCR引物在鉴定鸡巻羽性状和/或制备卷羽性状检测试剂盒中的应用。

3.一种鸡巻羽性状的分子鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.提取待测样本血液DNA；

S2.以S1所述DNA为模板，利用权利要求1所述引物进行PCR扩增反应；

S3.将S2的PCR扩增产物用限制性内切酶NaeI进行酶切反应，酶切产物电泳检测；

S4.根据S3的电泳情况进行结果判定：若扩增产物为一条带，则待测样本为卷羽鸡；若扩增产物为两条带，则待测样本为片羽鸡；若扩增产物为三条带，则待测样本为卷羽与片羽杂交品种。

4.根据权利要求3所述的分子鉴定方法，其特征在于，步骤S2所述PCR扩增反应体系为：模板DNA 1.5 μL，上下游引物各1 μL，2×Taq-Neo PCR Mix 25μL，加灭菌三蒸水21.5μL至总体积50μL。

5.根据权利要求3所述的分子鉴定方法，其特征在于，步骤S2所述PCR扩增反应程序为：94℃ 2 min；94℃ 1min，62℃30s，72℃ 1min共34个循环；72℃ 5 min。

6.根据权利要求3所述的分子鉴定方法，其特征在于，步骤S3所述酶切反应体系为：PCR扩增产物10μL，灭菌三蒸水18μL，10×Buffer Tango 2μL，Nael 2μL，混匀后于37℃孵育1小时。

7.根据权利要求3～6任一项所述的分子鉴定方法，其特征在于，步骤S1所述样本为怀乡鸡、麒麟鸡、贵妃鸡、文昌鸡、来航鸡、芦花鸡或其杂交一代F₁和杂交二代F₂。

8.一种鸡卷羽性状检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述PCR扩增引物及限制性内切酶NaeI。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包含PCR扩增反应及酶切反应所需试剂。