[发明专利]一种1;5-脱水山梨醇的检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于消除葡萄糖、葡萄糖6-磷酸和丙酮酸的试剂R1、用于将1,5-脱水山梨醇转化成1,5-脱水果糖与过氧化氢的试剂R2和用于检测过氧化氢的发光底物；所述试剂R1包括腺苷三磷酸、己糖激酶、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、葡萄糖6-磷酸脱氢酶、磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶；所述试剂R2包括吡喃糖氧化酶；所述发光底物为双氧杂环烷类化合物。

2.根据权利要求1所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述双氧杂环烷类化合物为1，2-二氧杂环丁烷硼酸。

3.根据权利要求1所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括下述浓度的组分：腺苷三磷酸0.01～10mmol/L、己糖激酶0.1～100KU/L、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.01～10mmol/L，葡萄糖6-磷酸脱氢酶0.1～100KU/L、磷酸烯醇式丙酮酸0.01～20mmol/L、丙酮酸激酶1～100KU/L和乳酸脱氢酶1～100KU/L；所述试剂R2包括下述浓度的组分：吡喃糖氧化酶0.01～20KU/L。

4.根据权利要求1所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括下述浓度的组分：腺苷三磷酸0.3mmol/L、己糖激酶30KU/L、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.6mmol/L、葡萄糖6-磷酸脱氢酶6KU/L、磷酸烯醇式丙酮酸3mmol/L、丙酮酸激酶10KU/L和乳酸脱氢酶10KU/L；所述试剂R2包括下述浓度的组分：吡喃糖氧化酶6KU/L。

5.根据权利要求1～4任一项所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含缓冲液、抗干扰剂、酶保护剂、酶促进剂和防腐剂；所述试剂R1包括下述浓度的组分：

所述试剂R2包括下述浓度的组分：

缓冲液 5～100mmol/L

吡喃糖氧化酶 0.01～20KU/L

防腐剂 0.01-0.2wt％

发光底物：1，2-二氧杂环丁烷硼酸。

6.根据权利要求5所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液或MES缓冲液；抗干扰试剂为抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶、过氧化氢酶中的至少一种；酶保护剂为海藻糖、蔗糖、甘露醇、聚乙二醇、牛血清白蛋白中的至少一种；酶促进剂为钾离子、镁离子中的至少一种；防腐剂为叠氮钠、苯甲酸钠、柠檬酸钠、生物防腐剂中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括下述浓度的组分：抗干扰剂2KU/L；酶保护剂：甘露醇0.5wt％、海藻糖2wt％、牛血清白蛋白0.5wt％；酶促进剂：硫酸镁4mmol/L。

8.根据权利要求5所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2中的缓冲液的pH值为7.0～9.0。

9.根据权利要求1～8任一项所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：

(1)在5μL待测样本中加入50μL试剂R1，37℃孵育3min；加入100μL试剂R2，孵育3min；加入发光底物，孵育3min，获得最终反应物；

(2)测定最终反应物的光信号强度，计算待测样本中1,5-脱水山梨醇的含量。