[发明专利]一种采用液相色谱检测半固体/固体乳制品中γ‑氨基丁酸的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体为一种采用液相色谱检测半固体/固体乳制品中γ-氨基丁酸的方法。

背景技术

干酪作为营养价值极高的乳制品，是一种以牛奶或羊奶为原料，在凝乳酶或其他适当的凝乳剂的作用下，使奶中的蛋白质凝固、排出凝块中的水分和乳清后成熟发酵而成的乳制品。由于排出了牛奶中大量的水分和乳糖，保留下牛奶中主要的营养物质，因此1公斤的奶酪需要10公斤的牛奶才可以制成，素有“奶黄金”之称。目前中国的干酪市场尚且有待开发，人均年消费干酪量与乳业发达国家相比有很大差距，针对中国人群口味和健康的功能性干酪充满了前景。

γ-氨基丁酸(GABA)是一种抑制性神经递质，2009年已被国家批准作为新食品原料，可用于食品的生产中。γ-氨基丁酸的效果主要有调控肌肉张力，抗炎症，抗焦虑和免疫调节等，同时对于糖尿病和抑郁症的防治也有相关的报道。由于其丰富的生理活性和功能，GABA已受到了众多食品厂商的青睐，添加GABA的功能性食品正成为研究的热点。

常用的GABA检测方法有薄层色谱、纸层析法、比色法、氨基酸分析仪测定、高效液相色谱法等。其中高效液相色谱法具有灵敏度高，重复性好等特点，被广泛应用于各类科研和检测行业中。目前国标中的检测方法主要针对饮料和茶叶中的γ-氨基丁酸进行检测，对固体或半固体食品中γ-氨基丁酸的快速准确的分析检测方法还鲜见报道。此外，常用的氨基酸衍生剂如领苯二甲醛(OPA)，2,4-二硝基氟苯(DNFB)等往往存在衍生产物不稳定，试剂毒性大等缺点，对检测工作的展开造成了很多不便。因此，建立干酪和酸奶中γ-氨基丁酸检测方法的研究工作，对食品质量控制和监督具有重要的意义。

发明内容

为解决现有技术中尚未有对半固体/固体乳制品中γ-氨基丁酸的检测方法的缺陷，本发明提供了一种采用液相色谱检测半固体/固体乳制品中γ-氨基丁酸的方法，实现的目的为能够除杂质干扰，快捷，准确检测出γ-氨基丁酸。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：本发明提供的一种采用液相色谱检测半固体/固体乳制品中γ-氨基丁酸的方法，包括如下步骤：

(1)酪蛋白的去除：将称取的半固体/固体乳制品匀浆后加入pH4.6的缓冲液，沉淀酪蛋白，离心后收集上清液；

(2)其余乳清蛋白的去除：在步骤(1)得到的上清液中加入甲醇沉淀步骤(1)中未去除的残留蛋白，离心收集上清；

(3)氨基酸的柱前衍生化反应：将步骤(2)收集的上清液用4-二甲胺基苯基偶氮苯磺酰氯衍生化试剂进行柱前衍生化反应。

(4)经过步骤(3)生化反应后，进入液相色谱分析，该步骤包括：

①设置具有梯度浓度的γ-氨基丁酸标准溶液，绘制γ-氨基丁酸标准溶液的峰面积-浓度标准曲线；

②将经过步骤(3)生化反映后的待测液用液相色谱检测，根据步骤①得到的γ-氨基丁酸标准溶液的峰面积-浓度标准曲线，即可得到待测液中γ-氨基丁酸的含量。

进一步的，所述步骤(1)中，将半固体/固体乳制品添加到乙酸-乙酸钠缓冲液中研磨匀浆，半固体/固体乳制品与缓冲液的体积比为1:10，在-10℃～4℃静置10～30min后，在10000～12000rpm转速、4℃条件下离心10～15min后，取上清液。

进一步的，所述步骤(2)中，步骤(1)得到的上清液与甲醇的体积比为1:2～3，在-10℃～4℃静置10～30min，再在10000～12000rpm转速、4℃条件下离心10～15min后，收集上清液。

进一步的，所述步骤(3)包括：

①将4-二甲胺基苯基偶氮苯磺酰氯溶解于色谱级丙酮中，配制出浓度为1mg/mL的衍生化试剂；

②在100μL步骤(2)得到的上清液中分别加入200μL 1mol/L的NaHCO₃-NaOH溶液、200μL ddH2O、500μL步骤①制备出的衍生化试剂，所述NaHCO₃-NaOH溶液的PH为9.8；

③将步骤②中的混合液充分混匀后，在60～65℃水浴中进行避光反应20～30min，反应后冰浴10～30min终止反应，然后以0.22μm微孔滤膜过滤。