[发明专利]一种采用液相色谱检测半固体/固体乳制品中γ‑氨基丁酸的方法

权利要求书

1.一种采用液相色谱检测半固体/固体乳制品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)酪蛋白的去除：将称取的半固体/固体乳制品匀浆后加入pH4.6的缓冲液，沉淀酪蛋白，离心后收集上清液；

(2)其余乳清蛋白的去除：在步骤(1)得到的上清液中加入甲醇沉淀步骤(1)中未去除的残留蛋白，离心收集上清；

(3)氨基酸的柱前衍生化反应：将步骤(2)收集的上清液用4-二甲胺基苯基偶氮苯磺酰氯衍生化试剂进行柱前衍生化反应；

(4)经过步骤(3)生化反应后，进入液相色谱分析，该步骤包括：

①设置具有梯度浓度的γ-氨基丁酸标准溶液，绘制γ-氨基丁酸标准溶液的峰面积-浓度标准曲线；

②将经过步骤(3)生化反映后的待测液用液相色谱检测，根据步骤①得到的γ-氨基丁酸标准溶液的峰面积-浓度标准曲线，即可得到待测液中γ-氨基丁酸的含量。

2.根据权利要求1所述的采用液相色谱检测半固体/固体乳制品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，将半固体/固体乳制品添加到乙酸-乙酸钠缓冲液中研磨匀浆，半固体/固体乳制品与缓冲液的体积比为1:10，在-10℃～4℃静置10～30min后，在10000～12000rpm转速、4℃条件下离心10～15min后，取上清液。

3.根据权利要求1所述的采用液相色谱检测半固体/固体乳制品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，步骤(1)得到的上清液与甲醇的体积比为1:2～3，在-10℃～4℃静置10～30min，再在10000～12000rpm转速、4℃条件下离心10～15min后，收集上清液。

4.根据权利要求1所述的采用液相色谱检测半固体/固体乳制品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述步骤(3)包括：

①将4-二甲胺基苯基偶氮苯磺酰氯溶解于色谱级丙酮中，配制出浓度为1mg/mL的衍生化试剂；

②在100μL步骤(2)得到的上清液中分别加入200μL 1mol/L的NaHCO₃-NaOH溶液、200μL ddH₂O、500μL步骤①制备出的衍生化试剂，所述NaHCO₃-NaOH溶液的PH为9.8；

③将步骤②中的混合液充分混匀后，在60～65℃水浴中进行避光反应20～30min，反应后冰浴10～30min终止反应，然后以0.22μm微孔滤膜过滤。

5.根据权利要求1所述的采用液相色谱检测半固体/固体乳制品中γ-氨基丁酸的方法，其特征在于，所述步骤(4)中液相色谱法的测定条件为：色谱柱为反相C18柱；检测波长为425～475nm；色谱柱温度为30～40℃；流动相A为PH4.0，浓度为25～75Mm NaCO₃-Ac缓冲液，流动相B为色谱级甲醇；流动相A和流动相B按比例混合均匀作为液相色谱检测的检测流动相，其中流动相A所占体积比例为25～50％，余下为流动相B，检测流动相使用前经微孔滤膜过滤，超声波脱气后使用；检测流动相流速为0.8～1mL/min；进样量2～10μL。