[发明专利]发酵法生产酪氨酸的大肠杆菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.生产酪氨酸的大肠杆菌重组菌株TYR012，其通过降低或解除TYR002重组菌中预苯酸脱氢酶的代谢产物反馈抑制并提高该酶的活性而得到，大肠杆菌重组菌株TYR002，其通过上调3-脱氢酶莽草酸脱氢酶aroE的表达而增强3-脱氢莽草酸脱氢酶酶活；

所述大肠杆菌重组菌种TYR002是以已进行改造的大肠杆菌WJ060，保藏号为CGMCC No.14602为基础，通过对3-脱氢酶莽草酸脱氢酶基因aroE进行表达调控构建获得，是通过两次同源重组的方法，是aroE起始密码子上游插入的合成调控元件P1替换为合成调控元件P4，P1其序列如SEQ ID NO:1所示，P4其序列如SEQ ID NO:4所示，并且把稀有起始密码子TTG替换为原始起始密码子ATG。

2.根据权利要求1所述大肠杆菌重组菌株TYR012的构建方法，包括如下步骤：以重组菌株TYR002为出发菌株，采用同源重组方法，将预苯酸脱氢酶编码基因序列替换为如SEQ IDNO:8所示序列和/或在预苯酸脱氢酶编码基因起始密码子ATG上游插入合成调控元件P4。

3.生产酪氨酸的大肠杆菌重组菌株TYR024，其通过抑制如权利要求1所述的TYR012重组菌中邻氨基苯甲酸合酶和/或抑制预苯酸脱水酶的活性而得到。

4.权利要求3所述大肠杆菌重组菌株TYR024的构建方法，包括如下步骤：

以重组菌株TYR012为出发菌株，采用同源重组方法，在邻氨基苯甲酸合酶编码基因的起始密码子ATG上游插入合成调控元件P5和/或将邻氨基苯甲酸合酶编码基因的起始密码子ATG替换为密码子TTG或GTG和将预苯酸脱水酶编码基因敲除；P5其序列如SEQ ID NO:5所示。

5.生产酪氨酸的大肠杆菌重组菌株TYR042，其通过同时提高如权利要求3所述的TYR024重组菌中莽草酸激酶、5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶、分支酸合酶、酪氨酸转氨酶的活性而得到。

6.权利要求5所述大肠杆菌重组菌株TYR042的构建方法，包括如下步骤：

以重组菌株TYR024为出发菌株，采用同源重组方法，在莽草酸激酶编码基因的起始密码子ATG上游插入合成调控元件P4和在5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶编码基因的起始密码子ATG上游插入合成调控元件P4和在分支酸合酶编码基因的起始密码子ATG上游插入合成调控元件P4和在酪氨酸转氨酶编码基因的起始密码子ATG上游插入合成调控元件P4。

7.根据权利要求5所述生产酪氨酸的大肠杆菌重组菌株TYR042，其保藏编号为CGMCCNo. 14833。

8.权利要求1、3、5或7中任一所述重组菌株在生产酪氨酸中的应用。