[发明专利]一株产褐藻胶裂解酶的菌株及其应用

说明书

本发明公开了一株产褐藻胶裂解酶的海科贝特氏菌(Cobetia marina)HQZ08及其应用，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，邮政编码：430072，保藏编号：CCTCC No：M 2017409，保藏日期：2017年7月5日。该菌株产生的褐藻胶裂解酶为胞外酶，分离纯化简单，无需细胞破碎；在优选条件下，未经分离纯化的粗酶液酶活达到68.5U/mL；本发明所述菌株HQZ08发酵培养基成分简单，发酵时间较短，可用于大量制备褐藻胶寡糖。

技术领域

本发明属于微生物菌株及其应用技术领域，具体涉及一株产褐藻胶裂解酶的海科贝特氏菌及其制备褐藻胶裂解酶的发酵方法与褐藻胶寡糖的制备方法。

背景技术

褐藻胶是一种从海洋褐藻中提取的多糖，在食品、医药、日用化工等行业都有普遍的应用，但由于其粘度高，水溶性低，不易被人体吸收，在应用方面受到一定的限制。褐藻胶寡糖是褐藻胶经降解得到的聚合度2～10的低聚糖，由于水溶性好，容易被人体吸收，因此其在医药领域具有较高的应用价值。研究表明褐藻胶寡糖具有神经保护、抗哮喘、抑菌、增强免疫力、抗肿瘤、降血糖血脂、抗凝血及促生长等活性，并且能有效抵抗人体衰老，是一种极具开发潜力的低聚糖。

现有技术中褐藻胶寡糖的制备方法主要有酶降解法、物理和化学降解法。物理法操作简单，无污染，节约试剂，可以有效的切断大分子链，但是降解所得的极限分子质量较大，不易制备出分子量较小的寡糖。化学降解法包括酸降解法及氧化降解法，酸解法降解速度慢，需要高温高压，降解效率低，活性较高的寡糖含量不高，且会对环境造成污染。氧化降解法反应过程简单，成本较低，但降解条件剧烈且对寡糖的还原端有一定的破坏作用。而酶解法是一种条件温和可控性强和特异性高的生物降解方法，具有降解产物活性高、产物专一性好、反应条件温和、无污染等诸多优势，但由于缺乏产酶活力高的菌株，导致褐藻胶裂解酶产量低下，提高了酶解法的生产成本，限制了该法的推广应用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一株产褐藻胶裂解酶的菌株。本发明产褐藻胶裂解酶的菌株名称为：海科贝特氏菌(Cobetia marina)HQZ08，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，邮政编码：430072，保藏编号：CCTCC No：M2017409，保藏日期：2017年7月5日。

本发明的另一个目的提供一种由上述产褐藻胶裂解酶的海科贝特氏菌(Cobetiamarina)HQZ08发酵制备褐藻胶裂解酶的方法，具体包括如下步骤：

(1)将海科贝特氏菌(Cobetia marina)HQZ08接种于斜面培养基，于25～30℃下培养24～48h，进行活化；

(2)将步骤(1)活化后的海科贝特氏菌(Cobetia marina)HQZ08接种于液体种子培养基中，于25～30℃、150～200r/min下振荡培养12～24h，得到种子液；

(3)将步骤(2)所得种子液接种于液体产酶培养基中，于25～30℃、150～200r/min下振荡培养24～48h，得到含褐藻胶裂解酶的发酵液；

(4)将步骤(3)含褐藻胶裂解酶的发酵液8000～12000r/min，10～15min离心分离、0.22μm过滤除去菌体，所得酶液即为褐藻胶裂解酶粗酶液；

步骤(1)所述斜面培养基的配方为：琼脂15～20g/L，海藻酸钠3～6g/L，蛋白胨3～5g/L，氯化钠25～30g/L，七水合硫酸镁0.5～1g/L，三水合磷酸氢二钾1～2g/L，七水合硫酸亚铁0.01g/L，pH 7～7.5；

步骤(2)所述的液体种子培养基的配方为：海藻酸钠3～6g/L，蛋白胨3～5g/L，酵母粉1～2g/L，氯化钠25～30g/L，pH 7～7.5；