[发明专利]一株产褐藻胶裂解酶的菌株及其应用

权利要求书

1.一株产褐藻胶裂解酶的菌株，所述菌株名称：海科贝特氏菌(Cobetia marina)HQZ08，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，邮政编码：430072，保藏编号：CCTCC No：M 2017409，保藏日期：2017年7月5日。

2.一种根据权利要求1所述产褐藻胶裂解酶的海科贝特氏菌(Cobetia marina)HQZ08发酵制备褐藻胶裂解酶的方法，具体包括如下步骤：

(1)将海科贝特氏菌(Cobetia marina)HQZ08接种于斜面培养基，于25～30℃下培养24～48h，进行活化；

(2)将步骤(1)活化后的海科贝特氏菌(Cobetia marina)HQZ08接种于液体种子培养基中，于25～30℃、150～200r/min下振荡培养12～24h，得到种子液；

(3)将步骤(2)所得种子液接种于液体产酶培养基中，于25～30℃、150～200r/min下振荡培养24～48h，得到含褐藻胶裂解酶的发酵液；

(4)将步骤(3)含褐藻胶裂解酶的发酵液8000～12000r/min，10～15min离心分离、0.22μm过滤除去菌体，所得酶液即为褐藻胶裂解酶粗酶液；

步骤(1)所述斜面培养基的配方为：琼脂15～20g/L，海藻酸钠3～6g/L，蛋白胨3～5g/L，氯化钠25～30g/L，七水合硫酸镁0.5～1g/L，三水合磷酸氢二钾1～2g/L，七水合硫酸亚铁0.01g/L，pH 7～7.5；

步骤(2)所述的液体种子培养基的配方为：海藻酸钠3～6g/L，蛋白胨3～5g/L，酵母粉1～2g/L，氯化钠25～30g/L，pH 7～7.5；

步骤(3)所述的液体产酶培养基的配方为：海藻酸钠5～7g/L，蛋白胨3～5g/L，氯化钠25～30g，三水合磷酸氢二钾1～2g/L，pH 7～7.5。

3.一种根据权利要求1所述产褐藻胶裂解酶的海科贝特氏菌(Cobetia marina)HQZ08发酵制备褐藻胶寡糖的制备方法，其步骤为：

(1)将海科贝特氏菌(Cobetia marina)HQZ08接种于斜面培养基，于25～30℃下培养24～48h，进行活化；

(2)将步骤(1)活化后的海科贝特氏菌(Cobetia marina)HQZ08接种于液体种子培养基中，于25～30℃、150～200r/min下振荡培养12～24h，得到种子液；

(3)将步骤(2)所得种子液接种于液体产酶培养基中，于25～30℃、150～200r/min下振荡培养24～48h，得到含褐藻胶裂解酶的发酵液；

(4)将步骤(3)含褐藻胶裂解酶的发酵液8000～12000r/min，10～15min离心分离、0.22μm过滤除去菌体，所得酶液即为褐藻胶裂解酶粗酶液；

(5)以步骤(4)所得褐藻胶裂解酶粗酶液对褐藻胶进行酶解，酶解体系如下：加酶量40～70U/g，底物浓度0.5～1％，酶解缓冲液为pH 7～8的PBS缓冲液，酶解温度35～45℃，酶解时间36～48h；

(6)将步骤(5)的酶解产物冷却后，离心过滤除去未降解的褐藻胶，制得褐藻胶寡糖；

步骤(1)所述斜面培养基的配方为：琼脂15～20g/L，海藻酸钠3～6g/L，蛋白胨3～5g/L，氯化钠25～30g/L，七水合硫酸镁0.5～1g/L，三水合磷酸氢二钾1～2g/L，七水合硫酸亚铁0.01g/L，pH 7～7.5；

步骤(2)所述的液体种子培养基的配方为：海藻酸钠3～6g/L，蛋白胨3～5g/L，酵母粉1～2g/L，氯化钠25～30g/L，pH 7～7.5；

步骤(3)所述的液体产酶培养基的配方为：海藻酸钠5～7g/L，蛋白胨3～5g/L，氯化钠25～30g，三水合磷酸氢二钾1～2g/L，pH 7～7.5。