[发明专利]一种CYP2C9和/或VKORC1基因多态性快速检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测CYP2C9和/或VKORC1基因多态性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有下列组分：热启动taq DNA聚合酶、10X血液直接PCR缓冲液、引物对、探针对和UNG酶；

所述引物对为选自以下中的至少一组：针对CYP2C9 C430T的SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.4、针对CYP2C9 A1075C的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.10，针对VKORC1 G-1639A的SEQ IDNO.13和SEQ ID NO.16；

所述探针为选自以下针对相应引物位点的突变型探针和野生型探针的至少一组：针对CYP2C9 C430T的SEQ ID NO.22和SEQ ID NO.19、针对CYP2C9 A1075C的SEQ ID NO.28和SEQID NO.25，针对VKORC1 G-1639A的SEQ ID NO.34和SEQ ID NO.31，探针的5'端和3'端标记有荧光基团；

所述10X血液直接PCR缓冲液包括有：100±1mM Tris-HCL、500±5mM KCl、20±1mMMgCl₂、50±5％甘油、25±1％DMSO、0.5±0.05％Tween-20，pH8.3±0.1。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述10X血液直接PCR缓冲液包括有100mM Tris-HCL、500mM KCl、20mM MgCl₂、50％甘油、25％DMSO、0.5％Tween-20，pH8.3。

3.根据权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述引物为针对CYP2C9 C430T的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4、针对CYP2C9 A1075C的SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.10，和针对VKORC1 G-1639A的SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.16；

所述探针为针对CYP2C9 C430T的SEQ ID NO.22和SEQ ID NO.19、针对CYP2C9 A1075C的SEQ ID NO.28和SEQ ID NO.25，和针对VKORC1 G-1639A的SEQ ID NO.34和SEQ IDNO.31。

4.根据权利要求1-2任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光基团为：探针的5'标记有VIC或FAM，3'标记有MGB。

5.权利要求1-4所述试剂盒的使用方法，其特征在于，包括：

(1)配置PCR反应体系，每个PCR体系包含下列组分：热启动Taq DNA酶、10X血液直接PCR缓冲液、引物对、探针对、dNTPs、UNG酶；并加入待测的人血液样品；

(2)将配置好的PCR体系放入荧光定量PCR仪中，进行Real-time PCR检测；反应条件为：

第一阶段：50℃2分钟UNG处理；

第二阶段：95℃4分钟预变性；

第三阶段：95℃15s，60℃35s，5个循环；

第四阶段：95℃15s，60℃35s，40个循环；

信号收集：第四阶段60℃时收集FAM和VIC信号。