[发明专利]一种检测辣椒脉斑驳病毒专用引物及其检测方法

说明书

一种检测辣椒脉斑驳病毒专用引物及其检测方法，涉及一种检测病毒引物及其检测方法，检测辣椒脉斑驳病毒所用到的PCR引物具体为：上游引物：ChiVMV‑CP‑F：如SEQ ID NO.1所示，即，5’‑GCACCATACATTTCAGAAACAGC‑3’，下游引物：ChiVMV‑CP‑R：如SEQ ID NO.2所示，即，5’‑GAACCACACTGAAGAATATGRATG‑3’。本发明所提供的PCR引物对ChiVMV的检出具有通用性，不仅能检测出龙葵样品中的ChiVMV，还可以检测到番茄样品中的ChiVMV。在检测过程中利用RT‑PCR手段，具有灵敏性高、操作简便等特点。实验表明，利用本发明检测龙葵和番茄上的辣椒脉斑驳病毒（ChiVMV），有较高的特异性。

技术领域

本发明涉及一种检测病毒引物及其检测方法，特别是涉及一种检测辣椒脉斑驳病毒专用引物及其检测方法。

背景技术

辣椒脉斑驳病毒（Chilli veinal mottle virus, ChiVMV），是Potyvirus的确定种，长约900nm，基因组为单链正义RNA，5’-端具有一个共价结合基因组连接蛋白(viralprotein genome-linked, VPg)，3’-端为20-160nt个腺苷酸组成的Poly(A)尾巴。基因组编码一个350 kDa的多聚蛋白(Polyprotein)，随后切割成解旋酶、复制酶和衣壳蛋白等8~10个蛋白参与病毒的复制、运动和包装。ChiVMV的传播主要通过虫媒的形式以非持久性进行传播。ChiVMV在亚洲危害严重，给越南、泰国、印度、巴基斯坦、韩国和中国的辣椒产业带来重创。在我国，ChiVMV在海南岛和台湾多地的辣椒和番茄上危害。ChiVMV侵染初期会诱导寄主植物表现为叶脉产生深色条纹、叶肉组织皱缩或叶面畸形等症状。后期则产生落花落果、果实畸形等症状。给我国辣椒和番茄的生产造成了重大的经济损失。

病毒病害的快速检测为病害控制提供了先决条件。目前，最普遍的分子检测手段是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction , PCR）。该技术是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。利用PCR扩增技术对植物病毒进行检测具有灵敏性和高效性等特点，由于其对任何材料、甚至含量很低的样品都能进行检测，因此被广泛应用于生物学研究的各个领域。

RT-PCR（reverse transcription-Polymerase Chain Reaction , RT-PCR）反转录聚合酶链式反应，在引物的作用下，先对RNA样品进行cDNA合成，在进行扩增。这种方法拥有高灵敏度、强转移性等特点。

PCR扩增或者RT-PCR扩增的首要条件是有一对已知引物。引物的设计涉及到长度、G+C含量、引物自身配对、引物二聚体、3’末端和特异性等情况。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测辣椒脉斑驳病毒专用引物及其检测方法，本发明提供一种检测辣椒脉斑驳病毒所用PCR引物，并以此引物为基础提供了一种龙葵和番茄中辣椒脉斑驳病毒（ChiVMV）的检测方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种检测辣椒脉斑驳病毒专用引物，所述一种检测辣椒脉斑驳病毒所用到的PCR引物具体为：

上游引物：ChiVMV-CP-F：如SEQ ID NO.1 所示，即，5’-GCACCATACATTTCAGAAACAGC-3’，

下游引物：ChiVMV-CP-R：如SEQ ID NO.2 所示，即，5’-GAACCACACTGAAGAATATGRATG-3’。