[发明专利]一种高纯度多拉菌素的制备方法

说明书

本发明公开了一种高纯度多拉菌素的制备方法，该方法将发酵液浸泡、分离，通过超滤膜进行纯化，再通过两次逆流萃取，得到的萃取液通过浓缩结晶。本发明的优点在于，工艺简单易行，得到的产品含量高。使用溶剂均全部可以通过较简单方式得到回收利用，生产成本降低，符合工艺绿色环保的大趋势。

技术领域

本发明属于工业微生物技术领域，具体涉及一种制备高纯度多拉菌素的方法。

背景技术

多拉菌素(doramectin，CAS号:117704-25-3)为20世纪90年代研制开发出的新一代大环内酯类抗寄生虫药，是以环已氨羧酸(cyclohexanecarboxylicacid)为前体，通过基因重组的阿维链霉菌(streptomyces avermitilis)新菌株发酵而成的一种阿维菌素类抗生素，是被认为目前阿维菌素族中最优秀的抗寄生虫药物之一，为内外兼杀剂，对线虫、节肢动物均有良好的驱杀效果，最早发现它驱杀寄生虫的能力是在驱鼠继代的蛇形毛圆线虫和杀兔痒螨的动物模型中，与其它市售的伊维菌素类产品比较，其抗寄生虫范围更广泛、效果更好，而且预防寄生虫再感染的有效时间更长，是目前具有开发潜力的兽用抗寄生虫药物。

中国专利CN201310383711.7“一种多拉菌素的分离纯化方法”中采用多次结晶的方式，混合溶剂种类较多，回收困难，不利于环保，且多次结晶必然导致收率偏低。其次专利中对菌渣萃取液采用浓度成膏状的方法，在实际生产中由于菌渣含水量及含量较低的问题，浓缩到后期需要将其浓缩到膏状，耗费的能源是很高的。

中国专利CN201310661993.2“一种高纯度多拉菌素的制备方法”中虽然对菌渣采用了干燥方法，降低了萃取液浓缩成膏状的难度，但是相应的干燥菌渣的动力成本依然不少。结晶溶剂依然难以常规方式回收，且得到产品的含量最高仅90％。

发明内容

为克服现有技术不足，本发明提供一种高纯度多拉菌素的制备方法，该方法将发酵液浸泡、分离，通过超滤膜进行纯化，再通过两次逆流萃取，得到的萃取液通过浓缩结晶。本发明方法工艺简单易行，得到的产品含量高；所使用溶剂均全部可以通过较简单方式得到回收利用，生产成本降低，符合工艺绿色环保的大趋势。

本发明技术方案如下：

一种高纯度多拉菌素的制备方法，包括以下步骤：

1)将多拉菌素发酵液过滤(可通过常规压滤)，得到菌渣(主要为菌丝体)；

2)向所得菌渣中加入极性溶剂，萃取，过滤，得到滤液；

3)调整步骤2)所得滤液中极性溶剂和水的浓度，使滤液中所述极性溶剂的浓度为70-73％(体积分数)；过滤；

4)将步骤3)所得滤液通过超滤膜进行超滤，得到超滤液；

5)将步骤4)所得超滤液进入逆流萃取器与第一溶剂进行萃取交换；

6)将步骤5)进行第一次逆流萃取交换后的超滤液再次进入逆流萃取器与第二溶剂进行萃取交换；

7)将步骤6)所得萃取液(即进行逆流萃取后的非水溶性的第二溶剂萃取液)浓缩到晶体析出，降温、养晶、过滤得到晶体；

8)将步骤7)所得晶体用丙酮溶解，滴加纯化水，降温、析晶、分离得到潮晶；

9)将所得潮晶真空减压干燥，即得到高纯度的多拉菌素结晶粉。

进一步地，步骤2)所述极性溶剂选自甲醇、乙醇等，优选为浓度75-80％(体积分数)甲醇溶液或乙醇溶液。

进一步地，步骤2)中，以g/mL计，菌渣干重与浓度75-80％甲醇溶液或乙醇溶液的重量体积比为1:5-7。