[发明专利]定量检测肉制品中羊、牛和猪源性的引物、探针和试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于TaqMan PCR技术一次性检测羊、牛和猪源性成分的引物、探针、试剂盒及检测方法，正向引物：5'‑AGAAATGGGCTACATT(T/C)TCT‑3'，反向引物：5'‑TTTACTGCTAAATCCTCCTT‑3'，羊探针：5'‑CCCAAGAAAATTTAATACGAAAGCCATT‑3'，牛探针：5'‑CACCAAGAGAATCAAGCACGAAAGTTATT‑3'，猪探针：5'‑CATAAGAATACCCACCATACGAAAGTTTTTAT‑3'；本发明的引物、探针及试剂盒的特异性好、灵敏度高，可以实现动物源性的定性和定量检测，并且可以进行羊、牛和猪源性的同时检测。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，尤其涉及动物源性检测领域。

背景技术

动物源性成分是指动物组织以及蛋和奶，包括肉类及其制品(含动物脏器)等食品或饲料。动物源性检测是指从动物源性食品(肉制品、乳制品等)以及饲料中检测其源性成分的过程。动物肉类、乳制品为人类的生命活动提供了丰富的蛋白质、脂肪和B族维生素等，是人们生活的重要食品来源。但在利益的驱动下在食品加工、流通和餐饮领域中掺假事件时有发生。由于价格差带来的利益诱惑，驱使一些不法商贩、企业在牛、羊、鹿等高价肉制品中掺杂猪、鸭等低价肉原料；用低价肉或非肉成分经香精处理后冒充高价肉；用牛奶冒充羊奶；用非原产地产品冒充原产地产品等；甚至还有一些商家厂家为谋取利益隐瞒或更改说明书。这些掺杂使假的行为不仅严重侵害了消费者利益，有时还会涉及到“民族”问题、“宗教”问题等不良的社会影响，如果问题产品出口到国外更会损害我国食品企业的整体形象而影响出口贸易。动物源性检测正是应对这些问题，除了起到保护消费者合法权利、民族利益、宗教信仰以外还能防止牛海绵状脑病(BSE)、传染性海绵状脑病(TSE)，疯牛病(MCD)以及口蹄疫(FMD)等人畜传染病的传播。作为牛、羊、马产品基地的锡林郭勒盟迫切需要研发具有自主知识产权的动物源性检测试剂盒。

近年来，肉、奶等食品中掺假造假的投诉事件不断上升，疯牛病的传播风险也在不断加大，作为保障食品安全、维护消费者利益的重要技术手段，食品和饲料中动物源性成分的定性或定量检测技术已成为国内外的研究热点。研发出适用于各种样品的多通道、高效、特异性强、快速的检测方法是亟待解决的问题。本试剂盒的研发是基于TaqMan PCR技术的多通道动物源性检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：如何提供一种高效且特异性强的基于TaqMan PCR技术的一次性检测羊、牛、猪源性成分的引物序列和探针，解决羊、牛、猪源性成分定性和定量检测问题。

本发明的技术方案为：基于TaqMan PCR技术一次性定性和定量检测羊、牛和猪肉源成分的引物和探针，引物和探针序列如下：

正向引物：5'-AGAAATGGGCTACATT(T/C)TCT-3'，

反向引物：5'-TTTACTGCTAAATCCTCCTT-3'，

羊探针：5'-CCCAAGAAAATTTAATACGAAAGCCATT-3'，

牛探针：5'-CACCAAGAGAATCAAGCACGAAAGTTATT-3'，

猪探针：5'-CATAAGAATACCCACCATACGAAAGTTTTTAT-3'；

羊、牛和猪探针序列的5'端修饰有报告基团，3'端修饰有淬灭基团，其中所述报告基团为FAM、HEX、ROX或CY5中的任意一种，所述淬灭基团为TAMRA、BHQ1或BHQ2中任意一种。

基于TaqMan PCR技术一次性定性和定量检测羊、牛和猪肉源成分的方法，步骤如下：

(1)利用CTAB法或者DNA提取试剂盒提取肉制品的DNA；

(2)检测DNA的浓度和质量，并将浓度稀释至100ng/μL；