[发明专利]针对转基因大豆dsABS品系的特异性PCR检测方法

说明书

本发明属于转基因食品检测技术领域，具体涉及一种针对转基因大豆dsABS品系的检测方法专利申请事宜。该方法须先设计引物Primer‑F和Primer‑R，然后包括提取待检测大豆样品的DNA、PCR扩增、电泳检测、判定等步骤。本申请针对转基因大豆dsABS品系开发设计，只要待测样品中含有不小于0.05%质量比例的转基因大豆dsABS品系时，均可检出，表现出较高的灵敏性，总体而言，具有特异性强、灵敏度高、检测结果准确可靠等优点，可为转基因大豆dsABS品系的种植监测、品种检测等奠定良好的方法学基础，具有较好的实用价值。

技术领域

本发明属于转基因食品检测技术领域，具体涉及一种针对转基因大豆dsABS 品系的检测方法专利申请事宜。

背景技术

在对进行转基因植物及其加工产品进行成分定性检测时，可根据其检测的特异性分为筛选检测方法、基因特异性检测方法和品系特异性检测方法等。其中品系特异性检测是通过检测插入载体与植物基因组的连接区序列实现的。由于每一个转基因植物品系，都具有特异的外源插入载体与植物基因组的连接区序列，因此品系特异性具有更高的特异性和准确性，最适合做转基因产品检测。

根据《转基因植物及其产品成分检测》国家标准，品系特异性检测方法中往往对特异性 PCR 反应扩增的产物有一定要求，即：长度 120~300bp 之间、扩增条带单一、并可用于多种仪器进行结果显示。只有符合这些要求，才能较好满足检测快速、准确、特异的要求，才能更加方便应用于转基因产品成分检测。

就转基因大豆dsABS 品系而言，该品系是由美国俄亥俄州立大学和中国热带农业科学院热带生物技术核技术研究所开发的大豆新品系。该品系以非转基因大豆（Glycine max）栽培品种Throne为受体，通过农杆菌介导法导入同时含有苜蓿花叶病毒、菜豆荚斑点病毒和大豆花叶病毒复制酶基因保守序列的发夹结构，因此该品系具有极好的同时抗苜蓿花叶病毒、菜豆荚斑点病毒和大豆花叶病毒三种病毒的能力。该品系目前正在一定范围内用于进一步的试验、推广种植阶段。但现有技术中尚未建立较好的针对该品系的检测方法，而建立一种较好的针对转基因大豆dsABS品系的特异性PCR检测方法，对于今后有效的对该转基因品系的推广种植及监控具有十分重要的技术意义和应用价值。

发明内容

本申请主要目的在于提供一种针对转基因大豆dsABS 品系的特异性 PCR 检测方法，从而为对该品系的准确和有效检测奠定基础。

本申请所提供的技术方案详述如下。

一对用于转基因大豆dsABS 品系检测用PCR引物，该引物根据转基因大豆dsABS的转化载体3'端及侧翼大豆序列 (所述侧翼大豆序列如SEQ ID NO.1所示)设计而成，包括Primer-F和Primer-R，引物序列如SEQ ID NO.2~3所示，具体为：

Primer-F ：5'-GAGAGGCGGTTTGCGTATTGGCTA-3'，

Primer-R ：5'-ACACTGTTCGCTCGCACTTATCTACT-3'。

一种针对转基因大豆dsABS 品系的特异性 PCR 检测方法，具体包括如下步骤：

（1）提取待检测大豆样品的 DNA；具体例如采用：CTAB法、异硫氰酸胍法或盐酸胍法等各种从植物材料中提取DNA的方法；

（2）利用上述所设计引物Primer-F和Primer-R，以步骤（1）中所提取DNA为模板，进行PCR扩增；

PCR扩增时，25μL扩增体系设计如下：

10×PCR缓冲液，2.5μL，

dNTPs混合溶液，2μL，

引物Primer-F，10 μmol/L、1.0μL；