[发明专利]针对转基因大豆dsABS品系的特异性PCR检测方法

权利要求书

1.一对转基因大豆dsABS 品系检测用PCR引物，其特征在于，该引物对包括Primer-F和Primer-R，引物序列如SEQ ID NO.2~3所示，具体为：

Primer-F ：5'-GAGAGGCGGTTTGCGTATTGGCTA-3'，

Primer-R ：5'-ACACTGTTCGCTCGCACTTATCTACT-3'。

2.利用权利要求1所述用于转基因大豆dsABS 品系检测用PCR引物的一种针对转基因大豆dsABS 品系的特异性 PCR 检测方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

（1）提取待检测大豆样品的 DNA；

（2）利用引物Primer-F和Primer-R，以步骤（1）中所提取DNA为模板，进行PCR扩增；

（3）对步骤（2）中PCR扩增产物进行电泳检测，根据是否能扩增得到预期的特定片段确定待测大豆样品的品系特异性，判定标准为：

如果PCR扩增片段大小与预期的特定片段一致，表明待测样品含有转基因大豆dsABS；如果没有特定扩增片段或扩增片段大小与预期的特定片段不一致，则待测样品不含有转基因大豆dsABS；

所述特定片段序列，包括320bp，如SEQ ID NO.4所示，具体为：

GAGAGGCGGTTTGCGTATTGGCTAGAGCAATTCGGCGTTAATTCAGTACATTAAAAACGTCCGCAATGTGTTATTAAGTTGTCTAAGCGTCAATTTGTTTACACCACAAGAAGGAAATATCACAACAAAAAAGGCAACAAGAAAAAAAAATGCAATACCACGTTAATCCAGATTGCTAATTAAATCTGAATGAGACATACAAAGCAAAACCAAGGTGATAAATCTGAACAAGACATCTAATACCTTAATCTATGTTCCACTCTTTGTCGTTAAAGGCACCATTCGCAGTGGTATAGTAGATAAGTGCGAGCGAACAGTGT。

3.如权利要求2所述针对转基因大豆dsABS 品系的特异性 PCR 检测方法，其特征在于，步骤（1）中，提取待检测大豆样品的 DNA，具体采用CTAB法、异硫氰酸胍法或盐酸胍法。

4.如权利要求2所述针对转基因大豆dsABS 品系的特异性 PCR 检测方法，其特征在于，步骤（2）中，PCR扩增时，25μL扩增体系设计如下：

10×PCR缓冲液，2.5μL，

dNTPs混合溶液，2μL，

引物Primer-F，10 μmol/L、1.0μL；

引物Primer-R，10 μmol/L、1.0μL；

EasyTaq酶，5U/μL、0.2μL；

步骤（1）中所提取的DNA 模板，25mg/L、2.0μL；

双蒸水加至25μL；

PCR 扩增条件为：94℃、5min；94℃、20s，58℃、20s，72℃、50s，35个循环；72℃、2min。