[发明专利]一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子，其氨基酸序列结构如下所示，本发明还提供了上述的一种的稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子在降解ERα蛋白中的用途。本发明还提供了上述的一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子在制备治疗乳腺癌的药物中的用途。本发明还提供了上述的一种的稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子的制备方法。通过荧光定量PCR实验证明本发明的多肽可以抑制ERα下游基因的表达。细胞增殖实验和凋亡实验也证明本发明的多肽通过凋亡途径杀死乳腺癌细胞。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，特别是一种多肽，具体是一种稳定多肽类蛋白靶向嵌合体分子及其制备方法和用途。

背景技术

乳腺癌已成为当前社会的重大公共卫生问题。乳腺癌中99％发生在女性，男性仅占1％。全球乳腺癌发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。近年我国乳腺癌发病率的增长速度高出高发国家1～2个百分点，全国肿瘤登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位。雌激素受体(ERα)在70％的乳腺癌中是高表达的。雌激素受体阳性的癌细胞的生长依赖于雌激素，它们可以用雌激素拮抗类的药物如他莫昔芬(tamoxifen)进行治疗，通常拥有较好的预后。昔芬类药物目前是乳腺癌治疗一线药物，但存在耐药的问题。针对雌激素受体阳性的癌细胞也可用抑制雌激素产生的芳化酶抑制剂进行治疗。芳化酶抑制剂适用于绝经女性使用。曲妥珠单抗(trastuzumab)是针对人类表皮生长因子受体2的单克隆抗体，可以阻止癌细胞的生长。然而，曲妥珠单抗价格高昂，并且牵涉严重的副反应。化疗药物常组合给药，常用的化疗组合是环磷酰胺和多柔比星，有时会加紫杉醇。然而化疗药物会伤害原本快速生长的正常细胞，进而造成严重的副反应。总体来说，各种疗法需要对应具体的情况，且存在耐药性和毒性的问题。因此发展治疗乳腺癌的新型疗法对解决上述问题很有意义。

长期以来人们关注的治疗性药物主要集中在两类：小分子药物(smallmolecules)、蛋白类药物(biologics)。而这两类治疗性药物由于其自身生物物理性质的局限性，并不能有效覆盖这所有已确证的重要分子靶点。多肽类药物则是另一类引起人们广泛关注和兴趣的靶向分子。与生物大分子类似，多肽类分子对于靶点也有较高的结合力与选择性，相对于小分子类药物具有更小的脱靶效应。而多肽在体内的代谢产物为氨基酸，最大限度地降低了毒性。传统的多肽类药物由于氨基酸残基数目有限，无法有效形成复杂二级结构，在生理溶液中有很高自由度并呈无规则线性状态，不仅降低了其特异性同时容易被蛋白酶所降解。并且多肽类药物的细胞膜穿透能力不是很好。通过化学手段修饰多肽将其稳定成为有二级结构的构象，不仅能够增加其对蛋白酶的稳定性，还能增强多肽的细胞膜穿透能力，并且还能够通过降低多肽与靶点结合时的熵变从而提高多肽与靶点的结合能力。通过各种化学修饰手段，将参与多种蛋白-蛋白相互作用的二级结构单元提取出来进行修饰，不仅通过稳定他们的二级构象来模拟原始蛋白质的相互作用，更重要的是通过修饰可以使得这些蛋白质二级结构单元具备穿透细胞膜的能力，进而靶向细胞内蛋白-蛋白相互作用。