[发明专利]一种基于EST-SSR标记的甜瓜杂交种甜9号种子纯度鉴定的方法在审
| 申请号： | 201711265047.0 | 申请日： | 2017-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN109868327A | 公开（公告）日： | 2019-06-11 |
| 发明（设计）人： | 兰青阔;王成;赵新;张若纬;武云鹏;张耀中;彭冬秀;焦贺敏;李秀秀;王永 | 申请（专利权）人： | 天津市农业质量标准与检测技术研究所;天津科润农业科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
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| 地址： | 300192 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 杂交种 种子纯度鉴定 纯度鉴定 甜瓜品种 甜瓜 带型 引物 甜瓜杂交种 杂交种种子 基因组DNA 田间试验 验证试验 引物设计 杂交品种 低成本 数据库 吻合 筛选 田间 检测 | ||
1.用于鉴定甜瓜杂交种“甜9号”种子纯度的1对SSR引物，其特征在于，包括上游引物序列：5’- TTGACCTTTTACGGTGGTCC -3’， 下游引物序列： 5’- CGGACAAATCCCTCTCTGAA -3’。
2.一种采用权利要求1所述引物，基于EST-SSR标记的甜瓜杂交种“甜9号”种子纯度鉴定的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）采用权利要求1所述的SSR引物对供试品种样品模板DNA进行PCR扩增，其中的PCR扩增反应的总体积为10 μL，扩增反应体系为：2×GoTaq®Master Mix 5 μL，上游和下游引物10μmol/L各0.5μL，供试甜瓜杂交种基因组DNA模板（50ng/μL）1μL，双蒸水补足10 μL；PCR反应程序为95℃预变性2 min，32个扩增循环（94℃ 45sec，55℃ 45 sec，72℃ 45 sec）；72℃延伸7 min，4℃保存；（2）对PCR扩增产物进行凝胶电泳，非变性聚丙烯酰胺凝胶浓度为8%，凝胶组分为：去离子水21 mL，10×TBE 3 mL，40 %PAG 6 mL，TEMED 30 μL，10% 过流酰胺 300 μL；设定电压 250 V，电泳 30 min，关闭电源，进行染色；染色过程：银染8～10 min，迅速水洗，NaOH显色数分钟，直至条带清晰即可，再次水洗；（3）通过分析EST-SSR结果，比较杂交种及其双亲的特征谱带，对供试种子样品进行共显性互补带型分析，通过计算供试品种样品中杂交种数量占总样品数量的比例确定种子纯度。
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