[发明专利]一种野生二粒小麦抗白粉病基因分子标记及其应用

权利要求书

1.一种野生二粒小麦抗白粉病基因分子标记，其特征在于：所述分子标记与以色列引进野生二粒小麦ES4中抗白粉病基因紧密连锁，所述分子标记是CAPs标记sdau732 ，用于扩增所述的分子标记的引物如下：

sdau732-F：5’-ttcttccctaatgacaccg-3’ ，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

sdau732-R：5’-ggtcgaaacttacatctgctcaag-3’ ，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的一种野生二粒小麦抗白粉病基因分子标记，其特征在于：利用所述的分子标记sdau732进行PCR扩增，在抗病材料ES4中扩增出一条999bp的片段，经限制性内切酶HhaI处理后，酶切为277bp和722bp的两条特异性片段。

3.根据权利要求1所述的一种野生二粒小麦抗白粉病基因分子标记，其特征在于：所述的分子标记sdau732，与野生二粒小麦ES4中抗白粉病基因的遗传距离为1.2cM。

4.根据权利要求1所述的一种野生二粒小麦抗白粉病基因分子标记，其特征在于：所述分子标记sdau732用于鉴定野生二粒小麦ES4中抗白粉病基因的步骤如下：

以野生二粒小麦ES基因组DNA为PCR模板，以CAPs标记sdau732为引物，进行PCR扩增，反应体系为15μl，所述反应体系包括：80-120ng/μl野生二粒小麦基因组DNA，2×Taq MasterMix，无菌水定容至15μl；

PCR扩增程序为：95℃预变性5min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，40个循环；72℃延伸10min，10℃保存备用；

取PCR产物8μl，限制性内切酶HhaI1μl，10×NEBuffer1.5μl，无菌水定容至15μl酶切体系，37℃条件下酶切2h；

电泳为1%的琼脂糖凝胶，将15μl酶切产物和5μl上样缓冲液混合后点样，120V电压下电泳30min，溴化乙锭染色后拍照；

分析鉴定，能酶切为277bp和722bp的两条特异性条带，则说明小麦种质中存在抗白粉病基因，否则，待测小麦种质中不存在野生二粒小麦抗白粉病基因。

5.根据权利要求1所述的一种野生二粒小麦抗白粉病基因分子标记，其特征在于：野生二粒小麦ES4抗白粉病基因连锁的分子标记在辅助选择育种中的应用。

6.根据权利要求1所述的一种野生二粒小麦抗白粉病基因分子标记，其特征在于：所述抗白粉病基因来源于以色列野生二粒小麦，位于4A染色体的长臂末端。