[发明专利]一种检测人类基因CEBPA的PCR引物及检测方法在审
| 申请号： | 201711095853.8 | 申请日： | 2017-11-01 |
| 公开（公告）号： | CN108220411A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 汝昆;蔺亚妮;贾玉娇 | 申请（专利权）人： | 天津协和华美医学诊断技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津合志慧知识产权代理事务所(普通合伙) 12219 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 301600 天津市静海区*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 基因 验证 琼脂糖凝胶电泳 退火 基因测序技术 正反向引物 物性 测序分析 二级结构 目的基因 目的片段 人类基因 随机分布 种检测 检测 碱基 切胶 条带 发现 回收 清晰 开发 | ||
1.一种检测人类基因CEBPA的PCR引物，由序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物组成。
2.根据权利要求1所述的PCR引物，其特征在于该PCR引物退火温度为60℃；正反向引物Tm值相差不超过2℃；目的片段长度为867bp和632bp；引物长度19-21bp；GC含量为40-60％。
3.一种检测人类基因CEBPA的PCR引物，由序列如SEQ ID NO.3所示的正向引物和序列如SEQ ID NO.4所示的反向引物组成。
4.根据权利要求3所述的PCR引物，其特征在于该PCR引物退火温度为60℃；正反向引物Tm值相差不超过2℃；目的片段长度为867bp和632bp；引物长度19-21bp；GC含量为40-60％。
5.一种应用权利要求1或3所述PCR引物检测人类基因CEBPA的方法，其特征在于该方法属于Sanger测序法，其中PCR反应成程序包括以下步骤：95℃预变性3min；95℃变性30s，52～70℃退火30s，72℃延伸70s，32个循环；于72℃最后延伸5min。
6.根据权利要求5所述的检测人类基因CEBPA的方法，其特征在于PCR反应成程序中退火温度为60℃。
7.根据权利要求5所述的检测人类基因CEBPA的方法，其特征在于该方法中目的片段扩增反应体系每20.1μL含有以下成分：GCracker PCR Buffer 10μL，双蒸水9μL，GCrackerPCR Enzyme 0.1μL，10μM的正、反向引物各0.5μL，浓度40～60ng/μL的DNA模板0.5μL。
8.根据权利要求5所述的检测人类基因CEBPA的方法，其特征在于其中PCR反应成程序执行完毕后，对PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳实验，所述琼脂糖凝胶电泳实验的反应条件为：2.5％琼脂糖凝胶，加入2000bp的DNA Marker，恒压140V，电泳30min。
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