[发明专利]一种即用型多探针杂交玻片及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种即用型多探针杂交玻片及其制备方法和应用。

背景技术

荧光原位杂交是一种在20世纪80年代放射性原位杂交技术基础上发展起来的一种非放射性分子遗传技术，以荧光素标记取代放射性同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。 FISH具有安全、快速、灵敏度高及同时显示多种颜色等优点。

目前在血液学FISH的检测中，通常使用的都是常规载玻片，并且探针和载玻片是分开单独使用的，通常需要先使用血液样本制片，再将玻片进行一系列前处理，再滴加探针并使用橡皮胶封片，封片后再进行探针样本共変性以及杂交；目前常见的血液病如白血病的FISH 检测项目多达数几十种，例如CLL(慢性粒细胞白血病)需要检测cMYC基因断裂、P16缺失、E2A断裂、超二倍体检测(CEP10/CEP17/CEP4)、TEL/AML1融合、MLL断裂、BCR/ABL 融合以及IGH断裂等来评估疾病类型及进程。如果以现有杂交技术在针对需要检测多种探针的疾病时需要重复进行多次检测，费时费力。此外传统的FISH实验使用的是传统FISH探针需要过夜杂交并且一次性检测多个项目不仅耗时，而且高昂的费用也增加了患者的经济负担。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种即用型多探针杂交玻片及其制备方法和应用。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种即用型多探针杂交玻片试剂盒，由探针附着玻片、各探针、杂交缓冲液和样本附着玻片组成；所述探针附着玻片上包含若干个相互独立的探针附着区，各探针以冻干的形式分别附着在各相互独立的探针附着区上；所述样品附着玻片上包含若干个相互独立的样品附着区，样品附着区与探针附着区一一对应，样品滴加在样品附着区上，当样本附着区与探针附着区贴合时，样品附着区的样品与相对应的探针附着区的探针实现杂交结合。

上述方案中，所述探针附着玻片由探针信息标识区、探针附着区域和杂交玻片接合区组成，所述探针信息标识区上记录了每个独立的探针附着区上对应的探针种类，所述探针附着区域内包含若干个相互独立的探针附着区，探针以冻干的形式附着在探针附着区上，所述杂交玻片接合区的表面附有丙烯酸脂胶水，用于探针附着玻片的包装封膜以及和样本附着玻片的粘结。

上述方案中，所述探针附着区域为一凹槽，凹槽内含若干个相互独立的探针附着小区块，每个独立的探针附着小区块由探针附着区和外围隔离区组成；每个独立的探针附着小区块之间存在隔离小沟。

上述方案中，所述样本附着玻片由样品信息记录区、样品附着区和样品隔离区组成，所述样品信息记录区上记录了样本信息，样品滴加在样品附着区上，所述样品隔离区用于防止样品交叉污染。

上述方案中，所述样品附着区采用亲水材质；所述样品隔离区附有疏水涂层。

上述方案中，所述杂交缓冲液的组分为：10wt％碳酸亚乙酯、30wt％硫酸葡聚糖、 1ugRNaseA、0.6M氯化钠、10mM柠檬酸缓冲液。

上述方案中，所述探针为FISH基因位点探针或FISH基因着丝粒/端粒探针。

上述方案中，各探针选自如下组合A或组合B：

组合A：BCR/ABL，IGH/BCL2，AML/ETO；

组合B：PML/RARA，BCR/ABL，P53，D13S319，1Q21，IGH/BCL2，CBFB，AML/ETO。

上述即用型多探针杂交玻片的制备方法，包括如下步骤：

(1)制备附着有各探针的探针附着玻片：

a.制备具有上述结构的探针附着玻片；

b.使用去离子水配制赋形剂，所述赋形剂的配方为：左旋糖苷0.5wt％、阿拉伯胶树 3wt％、甘露醇1wt％、聚丙烯酸酯0.3wt％；

c.分别配制各探针溶液，将各探针溶液分别与赋形剂混合均匀，分别滴加并均匀涂抹在探针附着玻片上每个独立的探针附着区上；然后将探针附着玻片冻干、封膜，制备得到附着有各探针的探针附着玻片；

(2)制备具有上述结构的样本附着玻片；

(3)配制杂交缓冲液；

(4)由制备所得附着有探针的探针附着玻片、杂交缓冲液和样本附着玻片组成即用型多探针杂交玻片。

上述即用型多探针杂交玻片的应用，具体包括如下步骤：