[发明专利]快速检测呼吸道B、C、E种人腺病毒DNA的方法

说明书

本发明提供了一种快速检测呼吸道B、C、E种人腺病毒DNA的方法，本发明的有益效果在于：本发明同时检测B、C、E三种人腺病毒DNA，其中B种人腺病毒包括3、7、16、21、50、66、11、14、34、35、55共11个血清型，C种人腺病毒包括1,2,5,6,57共5个血清型，E种人腺病毒包括4型1个血清型。试剂检测下限低至2Copies/PCR，定量线性范围：102～108Copies/ml,灵敏度100.0％(270/270),特异性99.8％(2881/2888)；符合率99.8％(3151/3158)；从样品处理到报告结果≤1.2小时；本发明简便、快速、灵敏度高、特异性好、成本低，特别适用于致呼吸道感染的B、C、E种人腺病毒精准诊断，为早期精准治疗赢得时间。

【技术领域】

本发明涉及一种呼吸道B、C、E种人腺病毒DNA的方法，尤其涉及一种快速检测呼吸道B、C、E种人腺病毒DNA的方法。

【背景技术】

腺病毒流行广泛，传播快，近年来在多个国家和地区时有爆发和流行，严重威胁到社会公共卫生安全。人腺病毒(Human mastadenoviruses,HAdV)可以感染多种粘膜组织，如胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道及眼角结膜等，导致自限性的粘膜感染甚至严重的致死性感染(Robinson,2011；2013a；Lenaerts,2008)。腺病毒感染还和肥胖症相关(Arnold,2010；Atkinson,2005；Dhurandhar,2000；董瑞,2013)。各个年龄段人群均能被腺病毒感染，其中易感人群多为婴幼儿和免疫功能受损的患者(如骨髓移植、人类免疫缺陷病毒感染和先天性免疫缺陷综合症)，常可引起严重甚至致死性感染(Stercz,2012)；军队中腺病毒是致发热性呼吸道疾病的重要病原体。HAdV暴发感染多发生在幼儿园、新兵营等封闭或拥挤的场所，大规模流行中其所致的病死率较高，甚至未经治疗的重症HAdV肺炎或弥散性疾病的死亡率可能超过50％。近年来，越来越多新的HAdV型别被发现，目前HAdV已有68个基因组型别。其中人B组腺病毒是致急性呼吸道感染(ARI)的重要病原体，传染性强，常导致爆发流行，在国内外多有报道，国内流行毒株主要型别为3型和7型，近年人14型和新出现的55型有多次爆发流行报道，其高致病力引起人们更多关注。

腺病毒的宿主非常广，包括哺乳动物猪、犬、牛、马、蝙蝠和猴、树鼩等，禽类鸡、鸭等，及冷血动物青蛙、蛇等，并在鲟鱼中也有发现。根据国际病毒分类委员会2014的报告，腺病毒科包括哺乳动物腺病毒(Mastadenovirus)、禽类腺病毒(Aviadenovirus)、感染两栖类的Siadenovirus、感染爬行类的Atadenovirus和感染鱼类的Ichtadenovirus五个属，其中哺乳动物腺病毒属目前发现有25个种，包括人腺病毒7个种(species A-G)。根据文献报道和GenBank数据显示已经有7种68个腺病毒型别(表1)。

表1人腺病毒的分类a

目前上市的商品试剂和/或公布的检测方法(CN 101107366 A、CN 103725800 A、CN 103993102 A、CN 104131006 A等)大部分是检测全部腺病毒的筛查试剂或方法。中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所公布(CN 105586439 A)的检测试剂虽可检测B、E种人腺病毒，但缺少C种腺病毒，且不是荧光定量的方法。这些试剂或方法均不能精准检测致呼吸道感染的B、C、E种人腺病毒，可能造成漏诊或误诊。

【发明内容】

本发明目的在于解决基于以上原因，在精准医学日益发展的当下，现有发明或试剂已无法满足需求，发明新的能实现精准诊断的方法或试剂迫在眉前的不足而提供的一种新型快速检测呼吸道B、C、E种人腺病毒DNA的方法。

本发明是通过以下技术方案来实现的：一种快速检测呼吸道B、C、E种人腺病毒DNA的方法，包括如下步骤：

(1)临床呼吸道样本采集和选取