[发明专利]一种猪细小病毒口服疫苗组合物及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种猪细小病毒口服疫苗组合物，其包含以下a)和b)、基本上由以下a)和b)组成、或者由以下a)和b)组成：a)、由马克斯克鲁维酵母重组工程菌表达的猪细小病毒VP2蛋白自组装形成的类病毒颗粒；b)、药学上或兽医学上可接受的用于口服制剂的辅料。本发明还公开了上述猪细小病毒口服疫苗组合物的制备方法和应用。本发明提供的猪细小病毒口服疫苗组合物具有良好的免疫原性，口服免疫小鼠后能够产生高滴度的保护性抗体，并具有安全性高、生产成本低并可放大规模生产、操作简单等优点，可应用于预防和减少PPV感染所引起相关性临床症状。

技术领域

本发明涉及生物技术和兽医领域，具体涉及一种猪细小病毒口服疫苗组合物及其制备方法与应用。

背景技术

猪细小病毒(porcineparvovirus，PPV)是一种极为常见的病原体，能引起猪的繁殖障碍，怀孕母猪的死胎和“木乃伊胎”、断奶仔猪多系统衰弱综合征等，而母猪通常无明显临床症状。目前，我国PPV病毒的流行极为广泛，约95％以上的猪场检测为PPV 病毒阳性，因此给养猪业造成巨大的经济损失。PPV属细小病毒科(Parvoviridae)，细小病毒属(Parvovirus)。PPV外观呈六角形或圆形，无囊膜，直径20～23nm，二十面体等轴对称，病毒基因为单股DNA，分子量为5.3×106Da。猪细小病毒按致病性与组织嗜性，崔尚金等将PPV分为5个类型，分别是NADL-2株为代表的非致病性毒株、对免疫不完全胎儿致病致死的毒株NADL-8和LAF-76、以Kresse株为代表的皮炎型强毒株、肠炎型毒株和呼吸道型毒株等，虽然已经分离出了多株PPV，但目前普遍认为PPV只有一个血清型。

猪细小病毒PPV基因组包括2个开放阅读框(open reading fragment，ORF)，ORF 1编码非结构蛋白NS-1、NS-2和NS-3，ORF2则编码结构蛋白VP1、VP2和VP3。 VP1的相对分子质量为83kDa，VP2的相对分子质量为64kDa，VP3的相对分子质量为60kDa，其中VP1和VP2有许多氨基酸序列是重叠的。VP1的N端有一个脯氨酸丰富区，对病毒转移起重要作用，是PPV复制和包装过程中不可缺少的一种结构蛋白，参与PPV与细胞特异性结合，有利于病毒侵染细胞。VP3是VP2的水解产物，在VP2 蛋白N端有9个连续甘氨酸，这种甘氨酸富集区折叠形成的α螺旋结构可能就是VP3 的切割位点。VP2蛋白是PPV衣壳蛋白的主要成分，在VP2蛋白上有PPV最主要的抗原决定簇，因此VP2蛋白是PPV主要的免疫保护性抗原，而且VP2蛋白还能在体外自我装配成类病毒颗粒(VLPs)。Martinez等(Vaccine，1992、10，p684-690) 将PPV-VP2基因克隆到杆状病毒表达系统中，发现在昆虫细胞中表达的VP2蛋白能自我装配成病毒样颗粒(virus like particles)。

猪细小病毒PPV引起的繁殖障碍疾病在临床上缺乏有效的治疗方法，预防性疫苗免疫是当前最为有效的防治措施。目前国内外市场上的PPV疫苗主要有灭活苗和弱毒疫苗这两大类，而传统的常规疫苗虽然对预防PPV感染有一定的作用，但仍然存在生产成本高、抗原滴度低以及毒力返强等缺陷。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明提供了一种免疫效果好、生产成本低、工艺简单以及更安全的新型猪细小病毒疫苗，并提供了其制备方法与应用。

本发明的技术方案如下：

本发明在第一方面提供了一种猪细小病毒口服疫苗组合物，包含以下a)和b)、基本上由以下a)和b)组成、或者由以下a)和b)组成：

a)、由马克斯克鲁维酵母重组工程菌表达的猪细小病毒VP2蛋白自组装形成的类病毒颗粒；

b)、药学上或兽医学上可接受的用于口服制剂的辅料；