[发明专利]阳性血培养物的鉴定芯片、试剂盒及鉴定方法

权利要求书

1.一种阳性血培养物的鉴定芯片，其特征在于，所述鉴定芯片具有多个反应室，包括阳性质控室、阴性质控室和细菌鉴定室；所述细菌鉴定室包括肺炎链球菌鉴定室、粪肠球菌鉴定室、鲍曼不动杆菌鉴定室、铜绿假单胞菌鉴定室、肺炎克雷伯菌鉴定室、大肠埃希菌鉴定室、金黄色葡萄球菌鉴定室以及流感嗜血杆菌鉴定室中的至少一种，所述细菌鉴定室及所述阳性质控室内均固定有等温扩增引物，其中，

所述粪肠球菌鉴定室内固定有序列分别如SEQ ID No:1～SEQ ID No:6所示的多条引物的组合；

所述金黄色葡萄球菌鉴定室内固定有序列分别如SEQ ID No:7～SEQ ID No:12所示的多条引物的组合；

所述大肠埃希菌鉴定室内固定有序列分别如SEQ ID No:13～SEQ ID No:18所示的多条引物的组合；

所述铜绿假单胞菌鉴定室内固定有序列分别如SEQ ID No:19～SEQ ID No:24所示的多条引物的组合；

所述肺炎链球菌鉴定室内固定有序列分别如SEQ ID No:25～SEQ ID No:29所示的多条引物的组合；

所述肺炎克雷伯菌鉴定室内固定有序列分别如SEQ ID No:30～SEQ ID No:34所示的多条引物的组合；

所述鲍曼不动杆菌鉴定室内固定有序列分别如SEQ ID No:35～SEQ ID No:40所示的多条引物的组合；

所述流感嗜血杆菌鉴定室内固定有序列分别如SEQ ID No:41～SEQ ID No:45所示的多条引物的组合；

所述阳性质控室内固定有序列分别如SEQ ID No:46～SEQ ID No:49所示的多条引物的组合。

2.如权利要求1所述的阳性血培养物的鉴定芯片，其特征在于，所述细菌鉴定室包括肺炎链球菌鉴定室、粪肠球菌鉴定室、鲍曼不动杆菌鉴定室、铜绿假单胞菌鉴定室、肺炎克雷伯菌鉴定室、大肠埃希菌鉴定室、金黄色葡萄球菌鉴定室以及流感嗜血杆菌鉴定室共八种。

3.一种阳性血培养物的鉴定试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的阳性血培养物的鉴定芯片。

4.如权利要求3所述的阳性血培养物的鉴定试剂盒，其特征在于，还包括DNA提取试剂、LAMP反应试剂、Bst DNA聚合酶、显色液、荧光染料以及去核酸水中的至少一种试剂。

5.如权利要求4所述的阳性血培养物的鉴定试剂盒，其特征在于，所述LAMP反应试剂包括反应缓冲液、dNTP、MgSO₄和甜菜碱。

6.如权利要求4所述的阳性血培养物的鉴定试剂盒，其特征在于，所述LAMP反应试剂中含添加有阳性质控DNA片段，所述阳性质控DNA片段是序列如SEQ ID No:50所示的斑马鱼ccna1基因的部分基因片段。

7.如权利要求4所述的阳性血培养物的鉴定试剂盒，其特征在于，所述显色液为羟基萘酚蓝溶液；所述荧光染料为SYBR green。

8.一种阳性血培养物的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

提取阳性血培养物的DNA；

以提取的DNA作为模板，将其与LAMP反应试剂混合后加入如权利要求1或2所述的阳性血培养物的鉴定芯片的细菌鉴定室内，并在所述鉴定芯片的阳性质控室和阴性质控室内加入相应的试剂；

在等温条件下进行核酸扩增反应，观察所述鉴定芯片的各反应室的颜色或荧光变化。

9.如权利要求8所述的阳性血培养物的鉴定方法，其特征在于，所述提取阳性血培养物的DNA是向所述阳性血培养物中加入DNA提取试剂后采用煮沸的方式提取所述DNA。

10.如权利要求8所述的阳性血培养物的鉴定方法，其特征在于，所述在等温条件下进行核酸扩增反应是将反应体系先于65℃反应50min，再80℃反应10min，最后在25℃冷却1min。