[发明专利]组氨酸工程改造的轻链抗体和用于生成所述抗体的经基因修饰的非人动物

权利要求书

1.一种生产抗体的方法，所述抗体表现出对目标抗原的pH依赖性结合，所述方法包括：

生产非人动物，所述非人动物在其种系中包含免疫球蛋白轻链基因座，所述免疫球蛋白轻链基因座包含单一重排的人源免疫球蛋白轻链可变区基因序列，其中所述单一重排的人源免疫球蛋白轻链可变区基因序列包含以所需亲和性结合目标抗原的第一抗体的人源V_L和J_L区段序列，

修饰所述单一重排的人源免疫球蛋白轻链可变区基因序列的所述人源V_L和J_L区段序列以包含不由对应人源种系V_L和J_L区段序列编码的组氨酸密码子，

在细胞中表达所述第一抗体的免疫球蛋白重链和所述修饰的免疫球蛋白轻链，以及

选择在所述细胞中表达的第二抗体，所述第二抗体在中性pH下保留了对所述目标抗原的所需亲和性，并在酸性pH下表现出对所述目标抗原的降低的结合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在所述非人动物中产生的第一抗体包含来源于人源V_H、D_H和J_H区段库的免疫球蛋白重链序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述单一重排的人源免疫球蛋白轻链可变区序列选自Vκ1-39/Jκ5和Vκ3-20/Jκ1基因序列。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述单一重排的人源免疫球蛋白轻链可变区序列是Vκ1-39/Jκ5，并且所述修饰在CDR3密码子中选自105、106、108、111及其组合的位置上包含至少一个非组氨酸密码子被组氨酸密码子取代。

5.根据权利要求3所述的方法，其中所述单一重排的人源免疫球蛋白轻链可变区序列是Vκ3-20/Jκ1，并且所述修饰在CDR3密码子中选自105、106、107、109及其组合的位置上包含至少一个非组氨酸密码子被组氨酸密码子取代。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述非人动物是小鼠。

7.一种靶向载体，其参照所述载体的5’和3’的小鼠同源臂的序列，在5’至3’的转录方向上包括5’小鼠同源臂、人源或小鼠免疫球蛋白启动子、人源或小鼠前导序列、人源可变区和3’小鼠同源臂，所述人源可变区选自重排的人源免疫球蛋白轻链可变区基因的人源可变区并且包括至少一个非组氨酸密码子被组氨酸密码子的取代。

8.一种分离的细胞，其分离自、来源自或用于生产非人动物，所述非人动物在其种系基因组中包含免疫球蛋白轻链基因座，所述免疫球蛋白轻链基因座包含含有人源V_L和J_L区段序列的单一重排的人源免疫球蛋白轻链可变区基因序列，

其中所述单一重排的人源免疫球蛋白轻链可变区基因序列的所述人源V_L和J_L区段序列包含组氨酸密码子的至少一个遗传修饰插入或取代，所述组氨酸密码子不由对应人源种系V_L和J_L基因序列编码，

其中所述单一重排的人源免疫球蛋白轻链可变区基因序列编码包含轻链可变结构域的免疫球蛋白链，所述轻链可变结构域含有由所述至少一个插入或取代的组氨酸密码子编码的氨基酸位置上的至少一个组氨酸残基，

其中所述免疫球蛋白轻链能够与由所述非人动物选择的多个免疫球蛋白重链配对并结合不同的表位。

9.根据权利要求8所述的分离的细胞，其中所述细胞选自淋巴细胞、来自所述淋巴细胞的杂交瘤和胚胎干细胞。

10.一种核酸，其分离自根据权利要求9所述的细胞。