[发明专利]用于改善的蛋白质分泌的表达载体有效
申请号: | 201710933102.2 | 申请日: | 2012-05-25 |
公开(公告)号: | CN107574177B | 公开(公告)日: | 2022-01-11 |
发明(设计)人: | C·德格林;T·埃格特;S·埃弗斯;K-H·莫勒;J·邦盖尔茨 | 申请(专利权)人: | 巴斯夫欧洲公司 |
主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N15/74;C12N15/75;C12N15/77;C12N9/50;C12N1/21 |
代理公司: | 北京市中咨律师事务所 11247 | 代理人: | 柴云峰;黄革生 |
地址: | 德国路*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 改善 蛋白质 分泌 表达 载体 | ||
1.表达载体,包含
a)启动子序列,和
b)编码蛋白质的核酸序列,所述蛋白质包含信号肽和枯草杆菌蛋白酶,其中所述信号肽如SEQ ID NO.4所示,且与枯草杆菌蛋白酶异源,其中所述枯草杆菌蛋白酶来自于迟缓芽孢杆菌且与SEQ ID NO.8具有至少97%的同一性。
2.根据权利要求1的表达载体,其中所述枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列选自如SEQ IDNO.8所示的序列或如SEQ ID NO.10所示且在SEQ ID NO.10的第99位氨基酸是谷氨酸的序列。
3.根据权利要求1或2的表达载体,其中信号肽排列在由b)的核酸序列编码的蛋白质中的枯草杆菌蛋白酶的N端。
4.根据权利要求1至3中任一项的表达载体,其中由b)的核酸序列编码的蛋白质还包含排列在蛋白质的信号肽和枯草杆菌蛋白酶序列之间的连接序列,连接序列的长度特别地在1和50个氨基酸之间。
5.非人宿主细胞,其包含根据权利要求1至4中任一项的表达载体。
6.根据权利要求5的宿主细胞,其中所述宿主细胞是细菌。
7.制备蛋白质的方法,所述方法包括步骤
(a)培养根据权利要求5或6的宿主细胞,
(b)从培养基或从宿主细胞中分离蛋白质。
8.根据权利要求6的宿主细胞,其中所述细菌选自埃希氏菌属(Escherichia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、芽孢杆菌属(Bacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、节细菌属(Arthrobacter)、链霉菌属(Streptomyces)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)和假单胞菌属(Pseudomonas)。
9.根据权利要求6或8的宿主细胞,其中所述细菌选自大肠杆菌(Escherichia coli)、特氏克雷伯氏菌(Klebsiella planticola)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)、球芽孢杆菌(Bacillus globigii)、吉氏芽孢杆菌(Bacillus gibsonii)、克劳氏芽孢杆菌(Bacillusclausii)、耐盐芽孢杆菌(Bacillus halodurans)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)、谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)、氧化节杆菌(Arthrobacter oxidans)、浅青紫链霉菌(Streptomyces lividans)、天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)和嗜麦芽糖寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)的细菌。
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