[发明专利]一种通过毛囊干细胞体外增殖评价生发冻干粉活性的方法

说明书

本发明实施例提供一种通过毛囊干细胞体外增殖评价生发冻干粉活性的方法，涉及生物技术领域，利用MTT检测方法作为体外评价生发冻干粉活性的标准，其操作方法简单，实用性强，可作为后期不同批次冻干粉使用前活性评价的参考依据，解决了生发冻干粉活性评价的问题，克服了批次间生发冻干粉活性检验的困扰。该通过毛囊干细胞体外增殖评价生发冻干粉活性的方法为首先制备人源性毛囊干细胞，并将生长期的毛囊干细胞胰酶消化后制备单细胞悬液，培养过夜之后给与生发冻干粉共培养，并设置不加冻干粉的细胞对照组，利用MTT方法进行吸光值的检测，获得生发冻干粉加入组与细胞对照组的吸光值，以此判定冻干粉的活性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种通过毛囊干细胞体外增殖评价生发冻干粉活性的方法。

背景技术

随着社会竞争加剧，社会压力增大，脱发的发病率逐年上升，且呈现出愈来愈年轻化的趋势。近年来，在我国各大医院脱发患者的门诊量在不断上升。脱发给患者的生活、精神和心理带来了极大的压力。目前临床上治疗脱发的药物主要是非那雄胺和米诺地尔，尽管使用后部分患者症状有所改善，但也因人而异，个别患者也会出现不良反应，并不能从根本上解决脱发的问题。因此有调查显示，约98%的脱发患者在使用了现有的防治脱发药物半年无效后会选择弃用。植发是近几年流行的新型技术，患者一般在中西药治疗无效之后会选用植发，但植发需要从自身后枕部健康毛发区取材再植入至前额、头顶等脱发区域，虽然有部分毛囊会在新部位生长，但对于头发本身稀疏的患者来说，这种“拆东墙补西墙”的做法并不能增加自身毛囊，且操作时间长，有严重痛苦感，价格昂贵，术后效果不能保证，还可能伴随有感染、肿胀等并发症出现，因此开发新的有效的生发药物有巨大的临床意义。

随着对脱发机理的逐渐认识及毛囊微观水平认知的不断提高，人们意识到毛发再生受到毛囊干细胞及其周围微环境的调控。干细胞是一种具有自我复制能力的多潜能细胞，具有向多种组织细胞分化的能力，因此开发针对于毛囊部位干细胞微环境修复的再生产品成为治疗脱发药物的发展趋势。

具有生发功效的冻干粉是一种在无菌环境下将富含多种生发因子的药液冷冻呈固态，抽真空将水分升华干燥后而成的无菌粉注射剂，内含多种高浓度有效成分，便于运输，使用方便。现有的研究发现毛囊及其周围组织能通过自分泌和旁分泌产生一些生物活性因子，经各种途径影响和调控毛发的生长发育和生长周期。其中，促进毛囊生长的细胞因子主要有：肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)、碱性成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor basic，bFGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)、胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor，IGF)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)等，因此富含以上生长因子的冻干粉为防治脱发提供了新的思路。但是，这类冻干粉如若批次间质量控制不严格或运输不当，就会造成有效成分降解、生物活性下降的结果，从而影响其生发的效果。因此，含生长因子类的生发冻干粉在使用前保证因子活性是取得生发效果的前提条件，而如何验证冻干粉是否具有生发活性成为首要解决的问题。

中国专利CN200710093074.4公开了“一种人源性细胞因子生发剂及其制备方法”是将人成纤维细胞、胎盘细胞、角质细胞或毛乳头细胞的培养上清液制成蛋白冻干粉末，之后将冻干粉末包封在脂质膜中，经过旋转蒸发，冻干后制成易于透过皮肤屏障，更加稳定的冻干粉。此发明所制备的冻干粉用于生发领域，但目前未见有实验验证其冻干粉活性的报道。