[发明专利]片断DNA检测方法、片断DNA检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种片断DNA检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

根据片断DNA的待检位点或待检区域设计引物；

将所述片断DNA进行环化，得到环化DNA；

利用所述引物对所述环化DNA进行PCR扩增；以及

对所述PCR扩增的产物进行检测，

所述片断DNA是指生物基因组的DNA随机断裂后形成的长度在20～2000bp的短片段DNA。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述引物是一对相邻且背向延伸的引物对。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述背向延伸的引物对中的引物均位于所述片断DNA的待检位点或待检区域的5’端或3’端。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述背向延伸的引物对之间间隔所述片断DNA总碱基对的0～1/2。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述背向延伸的引物对之间间隔0～50对碱基对。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述背向延伸的引物对之间间隔0～10对碱基对。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述背向延伸的引物5’端部分碱基重叠。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述引物为一条引物。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在对所述片断DNA进行环化之前，进一步包括对所述片断DNA进行预扩增的步骤。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环化采用的是CircLigase介导的双链DNA环化。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述片断DNA包括血浆游离DNA、尿液游离DNA、汗液游离DNA、唾液游离DNA或福尔马林固定石蜡包埋组织提取的DNA。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述片断DNA的待检测位点或待检区域具有插入、缺失、替换或基因融合突变。

13.一种片断DNA检测试剂盒，其特征在于，包括：DNA提取试剂、DNA环化酶、目标DNA扩增引物及扩增试剂，所述片断DNA是指生物基因组的DNA随机断裂后形成的长度在20～2000bp的短片段DNA。

14.根据权利要求13所述的片断DNA检测试剂盒，其特征在于，进一步包括：目标DNA预扩增引物及预扩增试剂。

15.根据权利要求13所述的片断DNA检测试剂盒，其特征在于，所述目标DNA扩增引物是一对相邻且背向延伸的引物对。

16.根据权利要求15所述的片断DNA检测试剂盒，其特征在于，所述背向延伸的引物对中的引物均位于所述片断DNA的待检位点或待检区域的5’端或3’端。

17.根据权利要求16所述的片断DNA检测试剂盒，其特征在于，所述背向延伸的引物对之间间隔所述片断DNA总碱基对的0～1/2。

18.根据权利要求17所述的片断DNA检测试剂盒，其特征在于，所述背向延伸的引物对之间间隔0～50对碱基。

19.根据权利要求18所述的片断DNA检测试剂盒，其特征在于，所述背向延伸的引物对之间间隔0～10对碱基。

20.根据权利要求15所述的片断DNA检测试剂盒，其特征在于，所述背向延伸的引物5’端部分碱基重叠。

21.根据权利要求13所述的片断DNA检测试剂盒，其特征在于，所述目标扩增引物为一条引物。

22.根据权利要求13所述的片断DNA检测试剂盒，其特征在于，所述片断DNA的待检测位点或待检区域具有插入、缺失、替换或基因融合突变。

23.根据权利要求13所述的片断DNA检测试剂盒在检测癌症、先天性单基因遗传病、染色体变异疾病、传染病中的应用。

24.根据权利要求13所述的片断DNA检测试剂盒在体外检测DNA突变中的应用。