[发明专利]筛选抗结核药物的组合物、筛选模型和筛选方法有效
| 申请号： | 201710858802.X | 申请日： | 2017-09-21 |
| 公开（公告）号： | CN109536465B | 公开（公告）日： | 2020-11-13 |
| 发明（设计）人： | 肖春玲;蒙建州;刘忆霜;邓琪;关艳;王冕;韩江雪;李东升 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医药生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12Q1/48;C12Q1/32;C12R1/19 |
| 代理公司： | 中国贸促会专利商标事务所有限公司 11038 | 代理人： | 苏红梅 |
| 地址： | 100050*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 筛选 结核 药物 组合 模型 方法 | ||
1.一种异源表达天冬氨酸半醛脱氢酶(ASD)的方法，其包括以下步骤：
(1)将含有pET28a(+)::asd表达质粒的菌株转接于含Km和提高细胞渗透压的试剂的培养基中，培养得到转接培养物，其中，所述提高细胞渗透压的试剂选自环化α-1,4-葡聚糖、环化糊精和山梨醇，其浓度为500-1000mM；
(2)将IPTG加入到所述转接培养物中，并于20℃-23℃下培养得到表达ASD的菌体细胞，其中，IPTG终浓度为5-20μM；
(3)收集步骤(2)中得到菌体细胞，裂解，得到ASD。
2.权利要求1的方法，其中IPTG终浓度为10-15μM。
3.权利要求1的方法，其特征在于下述的一项或多项：
a.步骤(1)中所述菌株为大肠杆菌BL21ATARTM(DE3)菌株；
b.步骤(1)中Km的浓度为100μg/mL；
c.步骤(1)中ASD表达菌株的接种量为2-10％；
d.步骤(1)中得到所述转接培养物的培养条件为：37℃±2℃、150-200rpm培养至OD600为0.6-1.0；
f.步骤(1)中所述培养基为LB培养基；
g.步骤(1)中，在转接前，还包括对所述菌株进行扩大培养的步骤；h.步骤(2)中得到所述表达ASD的菌体细胞的培养条件为：150-200rpm、8-24h；
i.步骤(3)中，在裂解后，还包括纯化的步骤。
4.权利要求3的方法，其中所述扩大培养是指将所述菌株在含100μg/mL Km的LB培养基上于37℃、200rpm培养8-16h或培养至细菌处对数生长期。
5.权利要求3的方法，采用柱层析方法进行所述纯化。
6.权利要求3-5任一项的方法，在纯化后，还包括脱盐的步骤。
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