[发明专利]一种用于检测SLCO1B1和ApoE基因多态性的组合物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测SLCO1B1和ApoE基因多态性的组合物及其应用，通过FAM、HEX、ROX(修饰)三通道多重PCR反应对SLCO1B1和ApoE基因中的单核苷酸多态性位点进行检测。为了提高检测的简便性和特异性，通过探针分型的技术手段实现一管分型检测，使得整个操作以及反应过程简单化，并在此基础上，对探针进行锁核酸修饰和二级结构修饰，增加探针的Tm值，进一步提高探针结合的特异性的，最后通过调整引物对的配比、Taq酶的用量、镁离子的用量等，提高整个试剂盒的最低检测限、准确性和特异性，试剂盒最低检测浓度能够达到1ng/μL，准确性和特异性均能够达到100％。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种用于检测SLCO1B1和ApoE基因多态性的技术。

背景技术

他汀类药物(statins)是羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，此类药物通过竞争性抑制内源性胆固醇合成限速酶(HMG-CoA)还原酶，阻断细胞内羟甲戊酸代谢途径，使细胞内胆固醇合成减少，从而反馈性刺激细胞膜表面(主要为肝细胞)低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein，LDL)受体数量和活性增加、使血清胆固醇清除增加、水平降低。他汀类药物还可抑制肝脏合成载脂蛋白B-100，从而减少富含甘油三酯AV、脂蛋白的合成和分泌。

他汀类药物分为天然化合物(如洛伐他丁、辛伐他汀、普伐他汀、美伐他汀)和完全人工合成化合物(如氟伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、罗伐他汀、pitavastatin)是最为经典和有效的降脂药物，广泛应用于高脂血症的治疗。

他汀类药物除具有调节血脂作用外，在急性冠状动脉综合征患者中早期应用能够抑制血管内皮的炎症反应，稳定粥样斑块，改善血管内皮功能。延缓动脉粥样硬化(AS)程度、抗炎、保护神经和抗血栓等作用。

中国人群的血脂水平逐年升高，血脂异常的患病率明显增加。预计到2030年我国心血管病事件增加至920万。以低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)或成人血清总胆固醇(TC)升高为特点的血脂异常是动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovasculardisease,ASCVD)重要的危险因素。有效的控制血脂异常，对我国ASCVD防控具有重要意义。

他汀类药物自问世以来在人类ASCVD防治史上具有里程碑式的意义。其能够抑制胆固醇合成限速酶HMG-CoA还原酶，减少胆固醇合成，继而上调细胞表面LDL受体，加速血清LDL分解代谢。此外，还可抑制VLDL合成。因此他汀类药物能显著降低血清TC、LDL-C和ApoB水平，也能降低血清TG水平和轻度升高HDL-C水平。

2016《中国成人血脂异常防治指南》给出了中国人群不同种类他汀类药物降胆固醇强度。多数人对他汀的耐受性良好，但部分患者SLCO1B1基因发生相关位点突变，则有可能表现出肌肉及肝功能异常等不良反应，这部分患者则无法接受大剂量他汀治疗。

此外，该指南指出，他汀与其它降脂药联合应用，可改善使用中等强度他汀治疗但胆固醇水平不达标或不耐受者的血脂情况。比如对于中等强度他汀治疗效果不佳的患者，可考虑中/低强度他汀与依折麦布联合治疗(I类推荐，B级证据)。通常接受他汀治疗效果不佳的患者，较大程度存在携带有ApoE 4等位基因。他汀通过增加LDL受体数量增强达到降低血脂水平，而携有ApoE 4等位基因的载脂蛋白E与LDL受体亲和力增加，导致反馈抑制LDL受体的表达，从而影响他汀药物的药效。

2010年伯克利心脏实验室发布Clinical Implications Reference Manual，给出了针对ApoE 4基因型患者的用药建议：大部分他汀类药物对于ApoE 4型患者治疗效果欠佳，可选用普罗布考或辛伐他汀。