[发明专利]一种重组大肠杆菌、制备方法及合成3,4‑二羟基丁酸的方法在审
| 申请号： | 201710611460.1 | 申请日： | 2017-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN107312737A | 公开（公告）日： | 2017-11-03 |
| 发明（设计）人： | 高海军;高玉 | 申请（专利权）人： | 北京理工大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P7/42;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京理工大学专利中心11120 | 代理人： | 周蜜,仇蕾安 |
| 地址： | 100081 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 大肠杆菌 制备 方法 合成 羟基 丁酸 | ||
1.一种重组大肠杆菌，其特征在于：通过敲除大肠杆菌中的木糖异构酶基因xylA、2-酮酸醛缩酶基因yjhH、2-酮酸醛缩酶基因yagE和醇脱氢酶基因，过表达木糖脱氢酶基因和/或2-酮酸脱羧酶基因，过表达醛脱氢酶基因，当醛脱氢酶基因为醛脱氢酶基因pduP(L.b)和/或醛脱氢酶基因pduP(K.p)时，还需同时过表达硫解酶基因tesB，得到所述的一种重组大肠杆菌Ⅰ。
2.一种如权利要求1所述的一种重组大肠杆菌，其特征在于：在重组大肠杆菌Ⅰ中进行过表达木糖酸脱水酶基因、敲除2-酮酸还原酶基因、敲除丙酮醛合酶基因、敲除葡萄糖特异性转运蛋白酶II CBGlc基因ptsG和过表达NADH氧化酶基因中至少一种处理，得到所述的一种重组大肠杆菌Ⅱ。
3.根据权利要求1所述的一种重组大肠杆菌，其特征在于：所述大肠杆菌为K12系列大肠杆菌。
4.根据权利要求1所述的一种重组大肠杆菌，其特征在于：醇脱氢酶基因为醇脱氢酶基因yqhD、醇脱氢酶基因adhP、醇脱氢酶基因adhE和醇脱氢酶基因fucO中的一种以上；
木糖脱氢酶基因为木糖脱氢酶基因xylB；2-酮酸脱羧酶基因为2-酮酸脱羧酶基因mdlC；
醛脱氢酶基因为醛脱氢酶基因feaB、醛脱氢酶基因aldB、醛脱氢酶基因puuC、醛脱氢酶基因ydcW、醛脱氢酶基因pduP(L.b)和醛脱氢酶基因pduP(K.p)中的一种以上，过表达载体为pDHC29。
5.根据权利要求1所述的一种重组大肠杆菌，其特征在于：大肠杆菌为K12系列大肠杆菌中的MG1655；
醇脱氢酶基因为醇脱氢酶基因yqhD、醇脱氢酶基因adhP、醇脱氢酶基因adhE和醇脱氢酶基因fucO中的一种以上；
木糖脱氢酶基因为木糖脱氢酶基因xylB；2-酮酸脱羧酶基因为2-酮酸脱羧酶基因mdlC；
醛脱氢酶基因为醛脱氢酶基因feaB、醛脱氢酶基因aldB、醛脱氢酶基因puuC、醛脱氢酶基因ydcW、醛脱氢酶基因pduP(L.b)和醛脱氢酶基因pduP(K.p)中的一种以上，过表达载体为pDHC29。
6.根据权利要求2所述的一种重组大肠杆菌，其特征在于：木糖酸脱水酶基因为木糖酸脱水酶基因xylD和/或木糖酸脱水酶基因HVO_RS00180，过表达载体为pTrc99a；
2-酮酸还原酶基因为2-酮酸还原酶基因yiaE；
丙酮醛合酶基因为丙酮醛合酶基因mgsA；
NADH氧化酶基因为NADH氧化酶基因noxE，过表达载体为pDHC29；
采用Red同源重组技术进行基因敲除。
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