[发明专利]一种抗PEDV的单克隆抗体及其化学发光方法检测方法

权利要求书

1.一种抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体，其特征在于：从猪流行性腹泻-猪传染性胃肠炎-猪轮状病毒的三联活疫苗中纯化获得猪流行性腹泻病毒毒株，作为制备猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的抗原；通过病毒培养、免疫Balb/c小鼠，单抗制备技术，经克隆，获得猪流行性腹泻病毒单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的一种抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体，其特征在于：其为IgG2a亚型单克隆抗体。

3.一种利用权利要求1所述单克隆抗体的检测猪流行性腹泻病毒的化学发光检测方法，其特征在于：利用所述单克隆抗体，通过包被液、单抗包被浓度、封闭液、酶标二抗浓度及反应时间的优化，建立了一种检测猪流行性腹泻病毒的化学发光检测方法。

4.根据权利要求3所述的化学发光检测方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

（1）抗体包被：采用磷酸盐缓冲液为包被液，以4ug/ml 猪流行性腹泻病毒单克隆抗体浓度包被于固相载体微孔板上，100ul/孔，37℃孵育2h或4℃过夜，洗涤3次；

（2）封闭：以2.5%BSA作为封闭液体封闭覆盖微孔板，每孔300ul/孔，4℃过夜，洗板3次；

（3）加样：依次加入样品，100ul/孔37℃温育1h，洗板3次；

（4）加酶标2抗：加入HRP酶标记的猪流行性腹泻病毒单克隆抗体，以1:4000稀释后的液体加100ul/孔，37℃ 45min，洗板6次；

（5）加检测底物：加入化学发光底物液100ul/孔，避光反应3min；

（6）检测：用发光检测仪测定发光计数。