[发明专利]环介导等温扩增结合侧向流动试纸条检测锦鲤疱疹病毒

权利要求书

1.一种检测锦鲤疱疹病毒的环介导等温扩增成套引物，由上游外引物、下游外引物、上游内引物和下游内引物组成；

所述上游外引物的核苷酸序列为序列1；

所述下游外引物的核苷酸序列为序列2；

所述上游内引物的核苷酸序列为序列3；

所述下游内引物的核苷酸序列为序列4。

2.根据权利要求1所述的成套引物，其特征在于：所述上游外引物、所述下游外引物、所述上游内引物和所述下游内引物的摩尔比为1:1:8:8；

或所述上游内引物或所述下游内引物标记生物素。

3.一种检测锦鲤疱疹病毒的环介导等温扩增试剂，包括权利要求1或2所述的成套引物、PCR扩增缓冲液和DNA聚合酶；

所述上游外引物和所述下游外引物的浓度均为0.2μmol/L；

所述上游内引物和所述下游内引物的浓度均为1.6μmol/L。

4.一种检测锦鲤疱疹病毒的试剂，由权利要求1或2所述的成套引物和探针组成；

所述探针的核苷酸序列为序列5，

或所述探针的5'端末端异硫氰酸荧光素FITC标记。

5.一种检测锦鲤疱疹病毒的试剂盒，包括权利要求1或2所述的成套引物或权利要求3所述的环介导等温扩增试剂或权利要求4所述的试剂。

6.权利要求1或2所述的成套引物或权利要求3所述的环介导等温扩增试剂或权利要求4所述的试剂或权利要求5所述的试剂盒在检测或辅助检测锦鲤疱疹病毒中的应用；

或，权利要求1或2所述的成套引物或权利要求3所述的环介导等温扩增试剂或权利要求4所述的试剂或权利要求5所述的试剂盒在制备检测或辅助检测锦鲤疱疹病毒产品中的应用；

或权利要求1或2所述的成套引物或权利要求3所述的环介导等温扩增试剂或权利要求4所述的试剂或权利要求5所述的试剂盒在检测或辅助检测待测样本是否感染锦鲤疱疹病毒中的应用；

或，权利要求1或2所述的成套引物或权利要求3所述的环介导等温扩增试剂或权利要求4所述的试剂或权利要求5所述的试剂盒在制备检测或辅助检测待测样本是否感染锦鲤疱疹病毒产品中的应用。

7.一种检测或辅助检测待测样本是否感染锦鲤疱疹病毒的方法，包括如下步骤：

1)用权利要求1或2所述的成套引物对待测样本进行环介导等温扩增，得到环介导等温扩增产物；

2)用权利要求4所述的试剂中的所述探针杂交所述环介导等温扩增产物，得到杂交产物；

3)侧向流动试纸条检测所述杂交产物，若所述试剂条的检测带显色2条，则所述待测样本感染或候选感染KHV，若所述试剂条的检测带显色1条，则所述待测样本未感染或候选未感染KHV。

8.一种检测或辅助检测待测样本是否感染锦鲤疱疹病毒的方法，包括如下步骤：

1)用权利要求1或2所述的成套引物对待测样本进行环介导等温扩增，得到环介导等温扩增产物；

2)电泳检测所述环介导等温扩增产物，若含有扩增产物，则所述待测样本感染或候选感染KHV，若不含有所述扩增产物，则所述待测样本未感染或候选未感染KHV。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述环介导等温扩增的模板为含有KHV特异基因片段的物质。

10.根据权利要求7-9中任一所述的方法，其特征在于：

所述环介导等温扩增的条件为63℃水浴45min；

或所述杂交的条件63℃杂交5min。