[发明专利]一种利用酶切技术鉴定大骨鸡品种的方法及PCR扩增专用引物对

权利要求书

1.一种利用酶切技术鉴定大骨鸡品种PCR扩增专用引物对，其特征是，所述PCR扩增专用引物对的核苷酸序列为：

上游引物序列为：5' CCACCTCACGAGAGATCAGC 3'，

下游引物序列为：5' GTGAGGGGAGTTAAGTGGCAT 3'。

2.一种利用权利要求1所述的引物通过酶切技术鉴定大骨鸡品种的方法，其特征是，所述鉴定方法为：利用所述PCR扩增专用引物对对大骨鸡样本DNA和待测肉样DNA混合样本在相同条件下首先进行PCR扩增，然后利用PCR产物进行酶切，最后采用琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，以大骨鸡样本DNA琼脂糖凝胶电泳图谱中两条电泳条带294bp，460bp为阳性结果；以大骨鸡样本DNA琼脂糖凝胶电泳图谱中只有一条电泳条带754bp为阴性结果；

将待测肉样DNA混合样本酶切产物电泳图谱与阳性结果进行比对：

如果待测肉样DNA混合样本酶切产物琼脂糖凝胶电泳图谱中出现两条电泳条带294bp，460bp，则认定待测肉样DNA混合样本为纯正的大骨鸡品种；

如果待测肉样DNA混合样本酶切产物琼脂糖凝胶电泳图谱中只出现一条电泳条带754bp，则认定待测肉样DNA混合样本为为假大骨鸡品种。

3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征是，所述PCR扩增反应体系为：2×PCR Mix 10 μl，10mol/μl上游引物 0.2μl，10mol/μl下游引物 0.2μl，DNA Mix 1μl，灭菌双蒸水 8.6μl。

4.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征是，所述PCR扩增的反应程序为95℃5 min； 95℃ 30 s，60℃ 30 s， 72℃ 30 s，经过30个循环，最后72°C 5 min。

5.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征是，所述PCR扩增产物为：

CCACCTCACG AGAGATCAGC AACCCCTGCT TGTAATGTAC TTCATGACCA GTCTCAGGCC60

CATTCTTTCC CCCTACACCC CTCGCCCTAC TTGCCTTCCA CCGTACCTCT GGTTCCTCGG120

TCAGGCACAT CCCATGCATA ACTCCTGAAC TTTCTCACTT TTCACGAAGT CATCTGTGGA180

TTATCTTCCC CTCTTTAGTC CGTGATCGCG GCATCTTCTC TCTTCTATTG CTGTTGGTTC240

CTTCTCTTTT TGGGGCTTCT TCACAGGTTG CCCTTCACAG TGCGGGTGCG GAGTACTATT300

CAAGTGAAGC CTGGACTACA CCTGCGTTGC GTCCTATCCT AGTCCTCTCG TGTCCCTCGA360

TGAGACGGTT TGCGTGTATG GGGAATCATC TTGACACTGA TGCACTTTGG ATCGCATTTG420

GTTATGGTTC TTCCACCCCC CCGGTAAATG GTGCTATTTA GTGAATGCTT GTCGGACATA480

TTTTTATCAA TTTTCACTTC CTCTATTTTC TTCACAAAAC TAGGAAATTC ACCACAATTT540

TTTCTTTGTT ATTTTTTAAT TTTTTTTTTA TTTTTTAAAA ACATTTTTTA AAAAACTAAA600

TTACATACAA ACTACCGCAT AAAATCCCTC AAACTATACA AACGTTTATC GTATAATATA660

TATACATTAT TGTTTATTCT ATCATTATTA GAGAAACTCC ACTACCAAAA CCATCATTAA720

AACAAAAATT TACATGCCAC TTAACTCCCC TCAC754

6.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征是，所述酶切反应体系为：10×Buffer 2 μl，SnaⅠ酶 4 μl，PCR扩增产物4 μl，灭菌双蒸水10 μl。