[发明专利]一种生物活性肽及其制备方法

权利要求书

1. 一种生物多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为：SEQ ID No.1 所示。

2.如权利要求1所述氨基酸序列的生物多肽在降血压及抗血栓药物方面的应用。

3.如权利要求1所述的一种生物多肽的制备方法，其特征在于，步骤如下：以牛乳或者酪蛋白为原料，选取合适的蛋白酶，在一定条件下酶解，然后采用膜技术进行浓缩，采用反渗透的方式进行脱盐，然后采用真空冷冻干燥技术或者低温喷雾干燥技术，得到多肽混合物。

4.根据权利要求3所述的一种生物多肽的制备方法，其特征在于，得到的多肽混合物再采用分子垂钓的方式，将与凝血酶亲和力强大的多个活性肽筛选出来，然后进行氨基酸序列的确定，将得到的氨基酸序列通过固相合成的方式合成目标多肽。

5.根据权利要求3所述的一种生物多肽的制备方法，其特征在于，步骤如下：

1）将酪蛋白溶于pH为7.0～8.0的水溶液中，加热至50～90℃处理5～10min，冷却至室温后得到酪蛋白溶液；

2）将步骤一样品冷却至室温后调节体系的pH，然后加入蛋白酶进行水解反应，灭酶处理后得到酶解溶液；

3）对酶解溶液进行离心处理，收集上清液，然后采用截留分子量1K～10KDa的膜进行超滤过滤，得到过滤后的酶解溶液；

4）将过滤后的酶解溶液在50～75℃、15～30MPa的条件下进行均质处理，得到均质后的酶解溶液；

5）将均质后的酶解溶液采用反渗透的方式进行脱盐处理，经杀菌、干燥后得到分子量低于5000的多肽质量百分含量占40%～80%的降血压及抗血栓活性多肽。

6）采用分子垂钓等方式，获得目标序列的多肽。

6.根据权利要求5所述的一种生物多肽的制备方法，其特征在于，步骤二所述的蛋白酶为胰蛋白酶时，使用碱性调节剂调节酪蛋白溶液体系的pH至7.0～8.5，然后在45～65℃恒温水浴条件下加入500～10000u/g胰蛋白酶进行水解反应5～180min。

7.根据权利要求5所述的一种生物多肽的制备方法，其特征在于，当步骤二所述的蛋白酶为菠萝蛋白酶蛋白酶时，水解反应过程是用碱性调节剂调节体系的pH至6.0～8.0，在50～60℃恒温水浴条件下加入500～10000u/g菠萝蛋白酶进行水解5～180min。

8.根据权利要求5所述的一种生物多肽的制备方法，其特征在于，当步骤二所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶时，水解反应过程是用碱性调节剂调节体系的pH至 5～7，在50～65℃恒温水浴条件下加入500～10000u/g木瓜蛋白酶进行水解反应5～240min。

9.根据权利要求4所述的生物多肽的制备方法，其特征在于，所述固相合成方法为：合成顺序：从序列C端到N端，步骤如下：

a.称取n当量树脂放入反应器，加入DCM溶胀半小时，然后抽掉DCM，加入序列中第一个氨基酸2n当量，加2n当量的DIEA，适量的DMF，DCM，DIEA、DMF、DCM，氮气鼓泡反应60min，然后加入约5n当量甲醇，反应半小时，抽掉反应液，用DMF、MEOH洗净； b.往反应器中加入序列中第二个氨基酸，2n当量HBTU及DIEA，N2鼓泡反应半小时，洗掉液体，茚三酮检测，然后用吡啶和乙酸酐封端，最后洗净，加入适量的脱帽液去除Fmoc保护基，洗净，茚三酮检测； c.依步骤b的方式依次加入序列中不同的氨基酸并进行各种修饰； d.将树脂用氮气吹干后从反应柱中取下，倒入烧瓶中，然后往烧瓶中加一定量的切割液，震荡，滤掉树脂； e.得到滤液，然后向滤液中加入大量乙醚，析出粗产物，然后离心，清洗即可得到序列的粗产物。