[发明专利]一种一步逆转录RT‑qPCR人MTHFR与MTRR基因多态性表达的检测试剂盒在审

申请号：	201710463701.2	申请日：	2017-06-19
公开（公告）号：	CN107236801A	公开（公告）日：	2017-10-10
发明（设计）人：	林家旺;张秋芳;崔勤;何幸	申请（专利权）人：	厦门金诺威生物科技有限公司
主分类号：	C12Q1/68	分类号：	C12Q1/68
代理公司：	暂无信息	代理人：	暂无信息
地址：	361000 福建***	国省代码：	福建;35
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摘要：
搜索关键词：	一种一步逆转录 rt qpcr mthfr mtrr 基因多态性表达检测试剂盒
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【权利要求书】：

1.一种一步逆转录RT-qPCR人MTHFR与MTRR基因多态性表达的检测试剂盒，其特征在于，包括MTHFR-C677T反应缓冲液、MTHFR-A1298C反应缓冲液、MTRR-A66G反应缓冲液、阳性对照、阴性对照、One step酶混合液。

2.根据权利要求1所述的一步逆转录RT-qPCR人MTHFR与MTRR基因多态性表达的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括1支800μL MTHFR-C677T反应缓冲液、1支800μL MTHFR-A1298C反应缓冲液、1支800μL MTRR-A66G反应缓冲液、1支50μL阳性对照、1支50μL阴性对照、1支50μL One step酶混合液。

3.根据权利要求1所述的一步逆转录RT-qPCR人MTHFR与MTRR基因多态性表达的检测试剂盒，其特征在于，所述MTHFR-C677T反应缓冲液包括One step RT-qPCR reaction buffer、RT增强剂、dNTPs、C677T特异性上下游引物、C677T特异性探针；

所述MTHFR-A1298C反应缓冲液包括One step RT-qPCR reaction buffer、RT增强剂、dNTPs、A1298C特异性上下游引物、A1298C特异性探针；

所述MTRR-A66G反应缓冲液包括One step RT-qPCR reaction buffer、RT增强剂、dNTPs、A66G特异性上下游引物、A66G特异性探针。

4.根据权利要求3所述的一步逆转录RT-qPCR人MTHFR与MTRR基因多态性表达的检测试剂盒，其特征在于，所述C677T特异性上下游引物为MTHFR-C677T-L、MTHFR-C677T-R；所述C677T特异性探针为MTHFR-C677T-P-W、MTHFR-C677T-P-M。

5.根据权利要求3所述的一步逆转录RT-qPCR人MTHFR与MTRR基因多态性表达的检测试剂盒，其特征在于，所述A1298C特异性上下游引物为MTHFR-A1298C-L、MTHFR-A1298C-R；所述A1298C特异性探针为MTHFR-A1298C-P-W、MTHFR-A1298C-P-M。

6.根据权利要求3所述的一步逆转录RT-qPCR人MTHFR与MTRR基因多态性表达的检测试剂盒，其特征在于，所述A66G特异性上下游引物为MTRR-A66G-L、MTRR-A66G-R；所述A66G特异性探针为MTRR-A66G-P-W、MTRR-A66G-P-M。

7.根据权利要求1所述的一步逆转录RT-qPCR人MTHFR与MTRR基因多态性表达的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照是人基因组DNA、突变质粒；所述阴性对照是生理盐水。

8.根据权利要求1所述的一步逆转录RT-qPCR人MTHFR与MTRR基因多态性表达的检测试剂盒，其特征在于，所述One step酶混合液是Taq酶、M-MLV酶、Rnasin inhibitor、酶稳定剂的混合液。

9.一种权利要求1-8任一所述的检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

(1)RNA提取；

(2)试剂准备和加样；

(3)上机检测，进行PCR扩增及荧光采集；

(4)检验结果的解释。

10.根据权利要求9所述的检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述PCR扩增及荧光采集相关参数设置为：

逆转录 50℃30min；

预变性 95℃5min；

PCR 95℃15s；60℃40s；循环5次；