[发明专利]基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒

权利要求书

1.基于免疫磁珠和MnO₂纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒，它包括：羧基化Fe₃O₄纳米粒子与抗副溶血性弧菌兔多抗偶联的免疫磁珠和MnO₂纳米粒子与抗副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体IgY偶联的MnO₂纳米探针；

所述的羧基化Fe₃O₄纳米粒子由下述方法制备：

添加1.08g FeCl₃.6H₂O到22mL乙二醇中，超声溶解10min；再添加1.2g NaAc和0.2g柠檬酸钠超声10min；最后，添加0.2g PEG6000于上述溶液中，超声混匀，将所得均质溶液转移至反应釜中，于199℃烘箱中反应18h；用永磁铁从反应溶液中分离出黑色的固体物质，用超纯水和乙醇交替清洗3-5次，得到羧基化Fe₃O₄纳米粒子；

所述的免疫磁珠由下述方法制备：

取0.5mg羧基化Fe₃O₄纳米粒子，用PBS洗2次，用1mL PBS重悬，加入10mg EDC和10mg NHS活化羧基，30min后，磁吸附，去上清，PBS洗3次，1mL PBS重悬，加入50µg抗副溶血性弧菌兔多抗，室温反应2h，磁分离，去上清，PBS洗3次，加入1mL封闭液封闭1h，得到功能化免疫磁珠；

所述的MnO₂纳米粒子由下述方法制备：

添加25mg牛血清白蛋白于10mL PBS中，搅拌混匀，加入100µL0.1MMnSO₄.H₂O于混合液中，搅拌2min，再向其加入1M的NaOH 100µL ，搅拌6-7h后，用超纯水透析48h，15000rpm离心，得到MnO₂纳米粒子；

所述的MnO₂纳米探针由下述方法制备：

取1mg MnO₂纳米粒子，PBS重悬，加入1mg EDC和1.5mg NHS活化15min，加入50µg抗副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体IgY，反应2h，15000 rpm离心，得到功能化MnO₂纳米探针。