[发明专利]一种宫颈癌相关基因甲基化程度的检测引物、探针、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种宫颈癌相关基因PAX1、FAM19A4、PHACTR3和DAPK甲基化程度的检测引物，其特征在于，所述的检测引物如下所示：

针对PAX1基因：

PAX1-F：5’-TTAGGGGGTAGTTGAGTAAGTT-3’；

PAX1-R：5’-AAAATAACCTATAAATCCCCAAACAA-3’；

针对FAM19A4基因：

FAM19A4-F：5’-TTTTAGTAGTAGTTTTAGGTTTT-3’；

FAM19A4-R：5’-ATCCCTTCCAACCCTTCTTA-3’；

针对PHACTR3基因：

PHACTR3-F：5’-GTTGGGGGAAGAGAGGTAGATT-3’；

PHACTR3-R：5’-CTTCCAAAAACAAATACCCAAAC-3’；

针对DAPK基因：

DAPK-F：5’-TTTTGGAGGTGGGAAAGTTG-3’；

DAPK-R：5’-AAAAACACCCTTTATTAAAACTAAAC-3’。

2.一种宫颈癌相关基因PAX1、FAM19A4、PHACTR3和DAPK甲基化程度的检测探针，其特征在于，所述的检测探针如下所示：

针对PAX1基因：

PAX1-M：5’-AAATAAAACGCGACGCATTAT-3’；

PAX1-U：5’-AAATAAAACACAACACATTATAACCC-3’；

针对FAM19A4基因：

FAM19A4-M：5’-CCGTACCGCCTCCCCGCGAAAA-3’；

FAM19A4-U：5’-CCATACCACCTCCCCACAAAA-3’；

针对PHACTR3基因：

PHACTR3-M：5’-AACCCAAAACCGACGCTAAACGA-3’；

PHACTR3-U：5’-AATAACCCAAAACCAACACTAAAC-3’；

针对DAPK基因：

DAPK-M：5’-ACCCCGCGCGCGCGTAAA-3’；

DAPK-U：5’-ACCCCTCAACCCCACACACACAT-3’；

M表示甲基化探针，U表示非甲基化探针，探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团，同一基因的甲基化探针和非甲基化探针的5’端标记的荧光报告基团是不同的荧光报告基团。

3.根据权利要求2所述的检测探针，其特征在于，所述的荧光报告基团为FAM、TET、VIC、HEX或ROX，所述的荧光淬灭基团为TAMRA、BHQ1、BHQ2或MGB。

4.一种含有权利要求1所述的检测引物和权利要求2所述的检测探针的检测试剂盒。

5.根据权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的检测试剂盒还包括2×Premix Ex Taq。

6.一种非疾病的诊断和治疗目的的宫颈癌相关基因PAX1、FAM19A4、PHACTR3和DAPK甲基化程度的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：提取待测宫颈组织的基因组DNA，将提取的基因组DNA进行亚硫酸盐转化，以亚硫酸盐转化的基因组DNA为模板，分别用针对PAX1基因的权利要求1所述的检测引物和权利要求2所述的检测探针、针对FAM19A4基因的权利要求1所述的检测引物和权利要求2所述的检测探针、针对PHACTR3基因的权利要求1所述的检测引物和权利要求2所述的检测探针、针对DAPK基因的权利要求1所述的检测引物和权利要求2所述的检测探针进行双探针荧光定量PCR扩增，根据甲基化探针和非甲基化探针的荧光报告基团的荧光信号，读取并记录甲基化探针的起峰Ct值和非甲基化探针的起峰Ct值，根据公式：甲基化值＝100/[1+2^(Ctm-Ctu)]，分别计算得到PAX1、FAM19A4、PHACTR3和DAPK基因的甲基化值，其中，Ctm为甲基化探针的起峰Ct值，Ctu为非甲基化探针的起峰Ct值。