[发明专利]一种用于检测大豆拟茎点种腐病菌的LAMP引物、试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 201710408300.7 | 申请日： | 2017-06-02 |
| 公开（公告）号： | CN107245517A | 公开（公告）日： | 2017-10-13 |
| 发明（设计）人： | 戚竞文;赵伟;鲍康胜;迟元凯;陈晴晴;汪涛;严丹侃 | 申请（专利权）人： | 合肥市第六中学;安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 安徽合肥华信知识产权代理有限公司34112 | 代理人： | 余成俊 |
| 地址： | 230039 安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 大豆 点种 病菌 lamp 引物 试剂盒 及其 应用 | ||
1.钙调素CaM蛋白编码基因序列作为靶标在检测大豆拟茎点种腐病菌中的应用，其特征在于：所述的基因序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。
2.一种用于检测大豆拟茎点种腐病菌的LAMP引物组，其特征在于，包括下列引物 ：
正向外引物F3：5’-TGCTAACGGACCGTTTTCG-3’，
反向外引物B3：5’-AAGGGACCGCATGACTGT-3’，
正向内引物FIP：5’-TGCGTAGCTGAGAAAGAGGGGAGCCTGCAGGATAAGGATGG-3’
反向内引物BIP：5’-CGTGCAGCTACTCCGACCGAGTGATTTGTCCTACACGCCA-3’。
3.权利要求2所述的LAMP引物组在检测大豆拟茎点种腐病菌中的应用。
4.权利要求2所述的LAMP引物组在制备检测大豆拟茎点种腐病菌的试剂盒中的应用。
5.一种用于检测大豆拟茎点种腐病菌的LAMP试剂盒，其特征在于：包含权利要求2所述的引物组。
6.根据权利要求5所述的用于检测大豆拟茎点种腐病菌的LAMP试剂盒，其特征在于包含：2.5μL 10 × ThermoPol Buffer，6mM MgSO4、0.8M Betaine, 1.4mM dNTPs, LAMP所用的LAMP特异性引物0.2μM F3, 0.2μM B3, 1.6μM FIP, 1.6μM BIP，8U Bst DNA polymerase组成的检测溶液。
7.一种大豆拟茎点种腐病菌的LAMP检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取16.5μL权利要求6所述的检测溶液，加入2μL待检测DNA溶液，加6.5μL灭菌超纯水至反应总体积25μL， 60°C下反应60 min；
（2）反应结束后加入0.25μL SYBR Green I作为显色反应指示剂，阳性反应溶液变为黄绿色，紫外灯下可以观察到荧光，表示存在大豆拟茎点种腐病菌，阴性反应溶液没有出现颜色变化，仍为橙色，紫外灯下不发荧光，表示不存在大豆拟茎点种腐病菌，或所含大豆拟茎点种腐病菌未达到最低检测量。
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