[发明专利]细粒棘球绦虫Sigma-谷胱甘肽S-转移酶重组蛋白及其可溶性表达方法和纯化方法

权利要求书

1.一种适用于囊型包虫病患者的免疫诊断的细粒棘球绦虫Sigma-谷胱甘肽S-转移酶重组蛋白，其特征在于：所述细粒棘球绦虫Sigma-谷胱甘肽S-转移酶重组蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.2所示。

2.根据权利要求1所述的适用于囊型包虫病患者的免疫诊断的细粒棘球绦虫Sigma-谷胱甘肽S-转移酶重组蛋白，其特征在于：编码所述细粒棘球绦虫Sigma-谷胱甘肽S-转移酶重组蛋白的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1中第63位-701位碱基所示。

3.权利要求1或2所述的适用于囊型包虫病患者的免疫诊断的细粒棘球绦虫Sigma-谷胱甘肽S-转移酶重组蛋白的可溶性表达方法，其特征在于：步骤如下：(1)目的基因Sigma-谷胱甘肽S-转移酶的扩增；(2)构建Sigma-GST表达质粒：将步骤(1)制备的目的基因Sigma-谷胱甘肽S-转移酶纯化后酶切，构建入pET-30a相应的多克隆酶切位点，构建质粒pET30a-Sigma-GST；(3)将步骤(2)制备的质粒pET30a-Sigma-GST转化入E.ColiBL21(DE3)感受态细胞中，将活化表达的菌液加入LB液体培养基中，置于摇床上于37℃，160r/min振荡培养4小时，再加入0.2mmol/L的IPTG于20℃诱导振荡培养7小时，离心、超声后收集上清。

4.权利要求1或2所述的适用于囊型包虫病患者的免疫诊断的细粒棘球绦虫Sigma-谷胱甘肽S-转移酶重组蛋白的纯化方法，其特征在于：步骤如下：(1)清洗HisTALONTMGravityColumns预装柱；(2)加入结合缓冲液，所述结合缓冲液为：50mM/LNaH₂PO₄，300mM/L NaCl，pH8.0；(3)加入细粒棘球绦虫Sigma-谷胱甘肽S-转移酶重组蛋白上清液，(4)加入漂洗缓冲液，所述漂洗缓冲液的配方为：50mM/L NaH₂PO₄，300mM/L NaCl，20mM/L咪唑，pH8.0；(5)加入1号洗脱液，所述1号洗脱液的配方为：50mM/L咪唑，50mM/LNaH₂PO₄，300mM/LNaCl，pH7.4；(6)加入2号洗脱液，所述2号洗脱液的配方为：100mM/L咪唑，50mM/L NaH₂PO₄，300mM/LNaCl，pH7.4；(7)加入3号洗脱液，所述3号洗脱液的配方为：200mM/L咪唑，50mM/L NaH₂PO₄，300mM/LNaCl，pH7.4；(8)加入4号洗脱液，所述4号洗脱液的配方为：300mM/L咪唑，50mM/L NaH₂PO₄，300mM/LNaCl，pH7.4；(9)加入5号洗脱液，所述5号洗脱液的配方为：400mM/L咪唑，50mM/L NaH₂PO₄，300mM/LNaCl，pH7.4；(10)分别收集4号和5号洗脱液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述细粒棘球绦虫Sigma-谷胱甘肽S-转移酶重组蛋白上清液与1号洗脱液、2号洗脱液、3号洗脱液、4号洗脱液、5号洗脱液的体积比为2:1:1:1:1:1。

6.权利要求1或2所述的适用于囊型包虫病患者的免疫诊断的细粒棘球绦虫Sigma-谷胱甘肽S-转移酶重组蛋白在制备检测细粒棘球蚴病的ELISA试剂盒中的应用。

7.一种适用于囊型包虫病患者的免疫诊断的检测细粒棘球蚴病的ELISA试剂盒，其特征在于：所述ELISA试剂盒中包被抗原为权利要求1或2所述的适用于囊型包虫病患者的免疫诊断的细粒棘球绦虫Sigma-谷胱甘肽S-转移酶重组蛋白。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述包被抗原用pH 9.6的0.05M/L碳酸盐缓冲液稀释至终浓度6μg/ml。