[发明专利]一种高产甘油低产乙酸的葡萄酒用酿酒酵母菌株及构建方法

权利要求书

1.一种高产甘油低产乙酸的葡萄酒用酿酒酵母菌株，其特征在于，按照以下步骤制备得到：

1）、以酿酒酵母NJZCC17（专利保藏号：CGMCC No. 3284）和NJZSC5（专利保藏号：CGMCCNo. 3732）作为出发菌株，进行单倍体分离，筛选得到两株单倍体菌株，分别命名为17A24(MATa)单倍体酿酒酵母和5125(MATα)单倍体酿酒酵母；

2）、采用基因敲除技术，利用pUG6质粒对17A24(MATa)单倍体酿酒酵母和5125(MATα)单倍体酿酒酵母的ALD6基因分别进行敲除，所设计的敲除质粒的引物为：

上游引物：

5'-AACATCAAGAAACATCTTTAACATACACAAACACATCTTCGTACGCTGCAGGTC-3'；

下游引物：

5'-TTTGTGTATATGACGGAAAGAAATGCAGGTTGGTACATTAGCATAGGCCACTAGTGGATCTG-3'；

PCR扩增体系（50 μL）的组成为：模板DNA 1 μL，10×PCR反应缓冲液（Mg²⁺plus）5.0 μL，10 μM引物（上下游）各1 μL，10mM dNTPs 4 μL，Taq DNA聚合酶5U/μL，ddH₂O37.75 μl，混匀；

PCR扩增条件为：94℃×4 min，一个循环；94℃×30 s, 62℃×30 s，72℃×1 min，30个循环；72℃×10 min，一个循环；

再利用pSH65质粒对两端带有loxP位点的G418抗性基因KanMX分别进行敲除；得到基因改良菌株17A24-ald6△(MATa)和5125-ald6△(MATα)；

3）、将基因改良后的17A24-ald6△(MATa)菌株和5125-ald6△(MATα)菌株进行二倍体杂交融合，最后得到新的二倍体杂交菌株NJZ17A5-ald6△(MATa/ MATα)。

2.权利要求1所述的高产甘油低产乙酸的葡萄酒用酿酒酵母菌株在葡萄酒发酵中降低乙酸产量且提高甘油产量的应用。

3.权利要求2所述的高产甘油低产乙酸的葡萄酒用酿酒酵母菌株在葡萄酒发酵中提高异戊醇和2-苯乙醇的产量并降低挥发性物质的产量的应用。