[发明专利]一种具有基因调控功能的硬组织工程支架的制备方法有效
| 申请号： | 201710316279.8 | 申请日： | 2017-05-08 |
| 公开（公告）号： | CN106943624B | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 陈晓峰;曹晓东;原波;孙璐瑶 | 申请（专利权）人： | 佛山今兰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A61L27/18 | 分类号： | A61L27/18;A61L27/10;A61L27/54;A61L27/56;D01D5/00 |
| 代理公司： | 44416 广州科沃园专利代理有限公司 | 代理人： | 张帅 |
| 地址： | 528000 广东省佛山市南海区狮山镇321*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 工程支架 质粒DNA 硬组织 制备 微纳米纤维 基因调控 生物玻璃 微球 介孔生物玻璃 静电纺丝技术 组织工程支架 热致相分离 分子水平 基因载体 精确调控 利用基因 目的基因 凝胶技术 乳液体系 细胞生长 重组技术 仿生骨 骨细胞 壳聚糖 包埋 基相 应答 配制 复合 细胞 刺激 基因 | ||
1.一种具有基因调控功能的硬组织工程支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在CaO-P2O5-SiO2体系中加入表面活性剂水溶性三嵌段聚合物p123，采用静电纺丝工艺制备生物玻璃微/纳米级纤维，控制纤维的定向排列，获得规则排列的纤维；将纤维在300～380℃的温度下，烧结120～150min，得到介孔生物玻璃微/纳米纤维, 其介孔生物玻璃微/纳米纤维表面形成有若干孔洞,所述孔洞的孔径尺寸范围为10～50nm；
(2)提取成骨细胞特异性转录因子Osterix靶向基因片段，构建目的基因质粒，利用 基因重组技术获得质粒DNA重组体；将壳聚糖溶液和质粒DNA重组体按照质量比2:1～5:1的比例混合，在50～100rpm的转速下快速搅拌的条件下形成质粒纳米微球；
(3)将步骤(1)所得的生物玻璃微/纳米纤维和步骤(2)所得的质粒纳米微球按照质量比10:1 ～20:1的比例混合均匀，然后加入到聚己内酯的有机溶液中制成乳液，将乳液加入模 具中，然后冷冻成型，脱模后将成型的支架再冷冻干燥12h，最终得到复合的硬组织工程支 架。
2.根据权利要求1所述的一种具有基因调控功能的硬组织工程支架的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的静电纺丝工艺参数为：静电电压10～25Kv，接收距离5～25cm，纺丝速率0.5～5ml/h，相对湿度20％-80％。
3.根据权利要求1所述的一种具有基因调控功能的硬组织工程支架的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的静电纺丝工艺，是通过采用转速<500rpm的高速旋转滚筒作为接收装置而实现控制纤维的定向排列。
4.根据权利要求1所述的一种具有基因调控功能的硬组织工程支架的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的静电纺丝工艺，是通过采用两块水平放置的平行板电极作为接收装置而实现控制纤维的定向排列。
5.根据权利要求1所述的一种具有基因调控功能的硬组织工程支架的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的静电纺丝工艺，是通过采用近场静电纺丝机作为接收装置而实现控制纤维的定向排列。
6.根据权利要求1所述的一种具有基因调控功能的硬组织工程支架的制备方法，其特征在于：步骤(3)所述的冷冻成型，是将盛装有所述乳液的模具先置于4℃冰箱中冷藏24h，然后再置于0℃冰箱中冷冻1h。
7.根据权利要求1所述的一种具有基因调控功能的硬组织工程支架的制备方法，其特征在于：步骤(3)所述的模具为中空圆柱形的模具。
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