[发明专利]一种荧光传感器的制备方法、一种检测酪氨酸酶的方法

说明书

本发明提供了一种荧光传感器的制备方法、一种检测酪氨酸酶的方法，与现有技术相比，本发明利用DNA 1和DNA 2碱基互补配对，DNA1和DNA2的DNA设计中，都包含一段含有30个T的碱基。该聚30T的碱基可以使Cu²⁺还原为Cu⁰，使之产生荧光。然后，加入抗坏血酸钠和硫酸铜，制备得到TTE DNA铜纳米粒子，具有荧光性能，利用酪氨酸酶可以快速有效的猝灭TTE DNA铜纳米粒子荧光的原理，来达到定量检测酪氨酸酶的目的。使用的试剂是低成本，不需要复杂的有机荧光化合物的合成，传感器设计过程非常简单，无需任何标记和修饰探针。检测准确度高、灵敏、检测限低。

技术领域

本发明属于荧光传感器技术领域，具体涉及一种荧光传感器的制备方法、一种检测酪氨酸酶的方法。利用TTE DNA(聚T两头被系住的DNA)铜纳米粒子的优越荧光性能，基于酪氨酸酶能猝灭TTE DNA铜纳米粒子溶液的事实，构建TTE DNA水凝胶可携带的可视化的检测酪氨酸酶。

背景技术

酪氨酸酶是一种典型的多酚氧化酶，是一种含铜酶，广泛分布于各种类型的生物体如：植物，动物组织和真菌中。酪氨酸酶能够催化酚类底物羟基化为邻苯二酚的衍生物，进一步氧化成邻醌类产品。该反应已被公认为是一些天然色素合成的关键过程，因此，酪氨酸酶是被认为是治疗一些色素减退相关问题的核心。此外，因为其对多巴胺神经毒性，酪氨酸酶的紊乱也可能导致帕金森病与神经的变性。更重要的是，生物体内中酪氨酸酶的反应会导致严重的皮肤病，如I型自身白化病，并且酪氨酸酶的累计被认为是黑素瘤癌症的生物标志。因此，灵敏的检测酪氨酸酶活性为生物医学提供可靠的诊断是非常紧迫的。

水凝胶是一种交联的亲水聚合物，并且它可以表现出特殊的性质和一些独特的特征。详细地说，凝胶属于一种特殊的软物质并由双连续部分组成：最小的组件是三维网络，主要部分是水性介质。这种网络对包裹试剂和固定探针是十分理想的。包裹的探针可以在水凝胶中保持其天然的结构和功能。由于水凝胶的多孔性质，外部目标或刺激都可以通过多孔接近内部探针。另外，因为水凝胶是透明的且背景低，有少干扰光学检测。由于水凝胶的优越性能，已被发展在生物化学的领域。

贵金属纳米团簇作为新一代荧光探针因为它们的高光稳定性，耐光性，和超小尺寸引起了相当大的关注。包括：DNA模板的金纳米粒子-银纳米粒子-铜纳米粒子。特别地，对于DNA为模板的制备的铜纳米粒子，由于其制备简单以及在温和环境条件下快速高效制备和环境友好性，受到了广泛的关注。虽然已经有课题组制备出了DNA铜纳米粒子的水凝胶，但是将DNA铜纳米粒子制作水凝胶中便携可视化的检测生物物质的报道并不多。

发明内容

本发明的目的在于提供一种荧光传感器的制备方法，利用TTE DNA(聚T两头被系住的DNA)模板制备出荧光性能更好的铜纳米粒子作为传感器。

本发明还提供了一种检测酪氨酸酶的方法，利用酪氨酸酶可以快速有效的猝灭TTE DNA铜纳米粒子荧光的原理，来达到定量检测酪氨酸酶的目的。

本发明提供的一种荧光传感器的制备方法，包括以下步骤：

1)DNA 1和DNA2分别用缓冲溶液稀释，分别得到DNA 1溶液和DNA 2溶液，待用；

2)混合稀释后的DNA 1溶液和DNA2溶液，培养，使DNA 1和DNA 2碱基互补配对；

3)培养结束后，加入抗坏血酸钠溶液和CuSO₄溶液，得到TTE DNA铜纳米粒子，荧光传感器制备完成。

步骤1)中所述缓冲液为10mM MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液。

步骤1)具体为：分别将DNA 1和DNA 2用10mM PH＝7.6的MOPS的缓冲溶液稀释到100μM，得到DNA 1溶液和DNA2溶液；