[发明专利]一种复合固体发酵物的制备方法及其用途

权利要求书

1.一种复合固体发酵的制备方法，其特征在于，包括以下几个步骤：

1）先将两株菌分别复壮活化，培养，然后接种于摇瓶培养基中，再通过种子罐到发酵罐进行逐级放大培养，分别得到两种菌各自液体发酵培养液；两株菌分别为啤酒酵母菌和干酪乳杆菌；

2）将两株菌各自培养好的液体发酵液与特定固体培养基按混合均匀；

3）将上述两种菌的液体发酵液与特定固体培养基按比例混合均匀，在温度为25~45℃的条件下好氧发酵24~30h，厌氧发酵72h，即为固体发酵产物。

2.如权利要求 1 所述的一种复合固体发酵的制备方法，其特征在于，经步骤 1) 的有氧发酵后，啤酒酵母活菌数达到 10-15 亿 CFU/mL，干酪乳杆菌活菌数达到20-80亿 CFU/mL。

3.如权利要求1 所述的一种复合固体发酵的制备方法，其特征在于，在所述步骤3) 中，所述有氧发酵条件为：空气相对湿度 50~80％，所述发酵菌液与接种的固体培养基混合后的水分控制在70~80％，啤酒酵母接种量为30~50%，干酪乳杆菌接种量为0.1~2%。

4.如权利要求1 所述的一种复合固体发酵的制备方法，其特征在于，在所述步骤1) 中，将所述干酪乳杆菌斜面种子接种至培养基：牛肉膏 10 g/L，蛋白胨 10 g/L，酵母浸粉 5 g/L，葡萄糖 20 g/L，柠檬酸钠 5 g/L，无水乙酸钠 5 g/L，K₂HPO₄ 2 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2 g/L，MnSO₄·5H₂O 0.05g/L，吐温 80 1 mL/L中扩繁，在35~45℃条件下有氧发酵 20~24 小时，制得基础菌液体发酵菌液；将啤酒酵母接种至葡萄糖：20 g/L，蛋白胨：20 g/L，酵母膏10 g/L培养基中，制得基础发酵菌液。

5.如权利要求 1 所述的一种复合固体发酵的制备方法，其特征在于，所述酵母菌液体基础培养基的组成为：葡萄糖：20 g/L，蛋白胨：20 g/L，酵母膏10 g/L；一级摇瓶种子啤酒酵母培养基组成为：葡萄糖：30~45 g/L，蛋白胨：8~13 g/L，(NH₄)₂SO₄：8~13 g/L，酵母膏：18~24 g/L，KH₂PO₄：0.5~1.5 g/L，MgSO₄: 0.2~0.8 g/L；初始pH 5.5~6.0, 115℃高压20 min，接种后控制该培养液转速在 160~180 r/min；干酪乳杆菌培养基组成为：牛肉膏 8~20 g/L，蛋白胨 8~20 g/L，葡萄糖 10~20 g/L，柠檬酸钠 3~10 g/L， K₂HPO₄2 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1~0.5 g/L，MnSO₄·5H₂O 0.01~0.1g/L，调节至pH 7.0~7.2, 121℃高压30min，接种后控制该培养液转速在 180~200r/min。

6.如权利要求 1 所述的一种复合固体发酵的制备方法，其特征在于，发酵罐利用深层培养法进行扩繁，即由罐底部通气搅拌的培养方法，相对于由气液界面靠自然扩散使氧溶解的表面培养法，培养基溶氧更好，啤酒酵母培养基成分配比为：葡萄糖: 5~15 g/L，蛋白胨：10~15 g/L，KH₂PO₄：0.5~1g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1~0.5 g/L ；干酪乳杆菌培养基组成为：葡萄糖：2~5g/L，蛋白胨：10~15 g/L， K₂HPO₄：0.5~1g/L，Na₂HPO₄:3~ 5g/L，柠檬酸钠 3~10 g/L，MnSO₄·5H₂O 0.01~0.1g/L，调节至pH 7.0~7.2。